Паровые коктейли: Паровые коктейли в Москве – купоны на скидку, акции

границ | Синергетический ферментный коктейль для усиления гидролиза взорванной паром пшеничной соломы в экспериментальном масштабе

Введение

Биоэтанол второго поколения может снизить нашу зависимость от невозобновляемых ископаемых видов топлива (Satlewal et al., 2017, 2018а; Франко и др., 2018; Кейн и Френч, 2018). Поскольку лигноцеллюлозная биомасса по своей природе является труднокальцинирующей, для улучшения гидролиза обычно требуется предварительная обработка при высокой температуре / давлении (Agrawal et al., 2015b, c, 2017b; Sharma et al., 2015a). Паровой взрыв (SE) широко применялся в качестве метода предварительной обработки для широкого спектра лигноцеллюлозных биомасс, таких как пшеничная солома, рисовая солома, жмых сахарного тростника, кукурузная солома, тополевые чипсы, ячменная солома, эвкалипт, просо, мискантус и т. Д.(Janzon et al., 2014; Sun et al., 2014; Jacquet et al., 2015; Pengilly et al., 2016; Zhai et al., 2016; Álvarez et al., 2017). Основным преимуществом SE является то, что он является автокатализируемым и считается нетоксичным и экологически безопасным методом, подходящим для коммерческого применения (Janzon et al., 2014; Sharma et al., 2015b) из-за отсутствия добавления или восстановления / нейтрализации. химикатов во время предварительной обработки, отсутствие проблем с коррозией и простые и экономичные операции (Ruiz et al., 2013).

Механизм SE обсуждался ранее, предполагая, что клеточная структура биомассы набухает под действием воды при повышенных температуре и давлении, вызывая гидратацию целлюлазы и деполимеризацию гемицеллюлазы, приводящую к образованию олигомеров и мономеров.Кроме того, водородная связь начинает ослабевать, позволяя автоионизацию воды в кислые ионы гидроксония (H ₃ O ⁺ ), которые действуют как катализаторы и основные гидроксид-ионы (OH ^— ). Более того, ионы гидроксония также образуются из ацетильных групп и уроновой кислоты, присутствующих в биомассе (Ruiz et al., 2017). По сравнению с предварительной обработкой кислотой или щелочью капитальные затраты на SE считаются низкими, потому что для SE не требуется особого материала конструкции.Кроме того, во время SE вырабатывается очень мало ингибиторов или не образуется вовсе (Pielhop et al., 2016; Walker et al., 2018).

Гетерогенная природа предварительно обработанной биомассы требует синергического действия множества и функционально различных лигно-целлюлолитических ферментов (таких как эндоглюканазы, экзоглюканазы, ксиланазы, манназы, эстеразы, арабинофуранозидазы и т. Д.) Для ее эффективного гидролиза (Loman and Ju, 2016; Lee et al. ., 2017; Kane and French, 2018; Sanhueza et al., 2018). Хотя ряд факторов ответственен за более низкий гидролиз биомассы, о высокой кристалличности целлюлазы, низкой доступности фермента, непродуктивном связывании фермента с лигнином, конкурентном ингибировании и ингибировании фермента по принципу обратной связи сообщалось преимущественно (Agrawal et al., 2015b; Parnthong et al., 2018). Таким образом, для достижения высокого уровня гидролиза биомассы обычно требуется большое количество фермента, но это отрицательно влияет на коммерческую жизнеспособность процесса.

Разработка коктейля синергических ферментов — это новая стратегия улучшения гидролиза биомассы (Satlewal et al., 2008; Sánchez-Cantú et al., 2018; Sanhueza et al., 2018). Ранее сообщалось, что как экзо, так и эндоглюканаза работают синергетически, разрушая целлюлазу до целлобиозы и, наконец, β-глюкозидаза гидролизует целлобиозу до глюкозы.Целлобиоза является более сильным ингибитором, чем глюкоза, и ее накопление вызывает ингибирование с обратной связью в отношении большинства целлобиогидролаз и эндоглюканаз, и поэтому становится важным обеспечить достаточное количество β-глюкозидаз для гидролиза целлобиозы до глюкозы, чтобы устранить такое ингибирование (Wang and Lu, 2016). Достаточное количество β-глюкозидазы может привести к ослаблению ингибирования обратной связи целлобиозой (de Oliveira Rodrigues et al., 2017). Другие вспомогательные ферменты, такие как гемицеллюлозы, эстеразы, арабинофуранозидазы, лакказы, удаляют физическое защитное покрытие микрофибрилл целлюлазы, тем самым улучшая доступность ферментов (Gonçalves et al., 2015). Поскольку ксилоолигомеры, полученные из гемицеллюлоз, ингибируют гидролиз либо путем физического блокирования фермента, либо путем конкурентного ингибирования целлюлаз; также необходимо оптимальное количество ксиланазы (Qing et al., 2010; Boyce and Walsh, 2018). Было обнаружено, что коммерчески доступные ферментные препараты первого поколения (такие как Spezyme CP, Celluclast и Novozyme 188) неэффективно гидролизуют ксилоолигомеры и преодолевают их ингибирующие эффекты при разумных дозировках (Qing et al., 2010; Agrawal et al., 2015b). Это связано с тем, что эти коммерческие ферменты обычно получают из нитчатых грибов ( Trichoderma ) и содержат большое количество экзо- и эндоглюканаз, но с меньшими количествами вспомогательных ферментов, таких как (β-глюкозидазы и гемицеллюлоза) (Agrawal et al. , 2015b; Pierce et al., 2017; Wu et al., 2017). В дополнение к этому, тип лигно-целлюлозной биомассы и подход к предварительной обработке приводят к различиям в их структурных свойствах (Satlewal et al., 2018б). Следовательно, разработка индивидуализированного ферментного коктейля в соответствии с подходом к предварительной обработке и типом биомассы может способствовать улучшению гидролиза биомассы. Несмотря на то, что было проведено несколько исследований синергизма ферментов, очень немногие из них оценивали коммерческие ферменты и предварительно обработанную паром солому пшеницы на экспериментальном уровне. Здесь кратко обсуждаются несколько опубликованных отчетов, к которым можно обратиться для получения дополнительных сведений. Такано и Хошино (2018), которые оптимизировали коммерческие ферментные реагенты для гидролиза рисовой соломы, предварительно обработанной щелочью, сообщили, что комбинация «целлюлазы Onozuka 3S», «целлюлазы T Amano 4» и «пектиназы G Amano» улучшила эффективность гидролиза с помощью доходность 94%.Soleimani и Ranaei-Siadat (2017) сообщили, что оптимизированный коктейль ферментов, оптимизированный с помощью методологии поверхности отклика, включает ферменты, включая экзо-1,4-β-D-глюканазы II (CBHII), эндо-1,4-β-D-глюканазы. II (EGII) и 1,4-β-D-глюкозидазы I (BGI) улучшили разложение предварительно обработанного багассы. В аналогичном отчете были закуплены 14 коммерчески доступных целлюлолитических и гемицеллюлолитических ферментов, которые были смешаны вместе для создания множества коктейльных комбинаций. Такой подход смешивания неочищенных коммерчески доступных ферментных коктейлей позволил в 4 раза снизить общую потребность в ферментах для достижения высоких выходов гидролиза (Chundawat et al., 2017).

В этом исследовании был проведен комплексный анализ синергизма между целлюлазой и вспомогательными ферментами (ксиланаза, пектиназа, β-глюкозидазы и т. Д.) Для количественной оценки их влияния на гидролиз предварительно обработанной паром соломы пшеницы (SEWS) в пилотном масштабе. Эта работа подтвердила гипотезу о том, что вспомогательные ферменты играют решающую роль в гидролизе биомассы, и их оптимизация является важным инструментом для увеличения производства сбраживаемого сахара (Sharma et al., 2017). Кроме того, смесь ферментов собственной разработки (EnzMix) была протестирована с использованием новейших коммерческих ферментных препаратов ведущих производителей.

Материалы и методы

Биомасса, химические вещества и препараты ферментов

Пшеничная солома (WS) была закуплена на месте в Фаридабаде, Харьяна, Индия. Его измельчали ​​до размеров 1-2 мм с помощью режущей мельницы (Texol, Пуна, Индия) и хранили в герметичных пластиковых пакетах при комнатной температуре. Все химические вещества аналитической чистоты (например, целлобиоза, глюкоза, ксилоза, арабиноза, фурфурол, гидроксиметилфурфурол, уксусная кислота и BCA-1) и лигно-целлюлолитические ферменты целлюлаза (Celluclast 1.5L), β-глюкозидаза (i.е., BGL или Novozym 188 в этом исследовании), ксиланаза, пектиназа и лакказа были закуплены у Sigma Aldrich, Индия. Другие ферментные препараты, такие как Cellic от Novozymes, Дания; Accellerase от Genencor Dupont, США и индийских производителей, таких как Sacchari-SEB-C6 от Advanced Enzyme, Мумбаи; Bioconvert L1 и Bioconvert P 10 от Noor Enzymes, Западная Бенгалия; были либо приобретены, либо любезно предоставлены ими в качестве подарка.

Пилотный паровой взрыв

Установка парового взрыва содержит реактор высокого давления собственной разработки емкостью 10 л, парогенератор (~ 300 ° C) с клапаном быстрой подачи, циклонный сепаратор и шумоглушитель.Для быстрого достижения заданной температуры варочный котел парового взрыва промывали 3–4 раза паром высокого давления (15 бар). Пропитку WS проводили партиями по 15 кг, помещая ее в перфорированный сетчатый контейнер из нержавеющей стали (SS) и погружая в воду. Жидкость циркулировала с помощью пневматического насоса для каждого эксперимента в течение 30 мин при комнатной температуре (30 ° C). Пропитанную пшеничную солому обезвоживали с помощью гидравлического пресса при давлении 100 бар. Прессованную солому пшеницы тщательно перемешивали для определения содержания влаги с помощью анализатора влажности (MA 150 Sartorius, Германия).0,4 кг прессованной соломы пшеницы на сухой основе загружали в реактор и повышали температуру путем впрыска пара высокого давления. WS предварительно обрабатывали при температуре 200 ° C в течение 10 мин (Agrawal et al., 2014; Sharma et al., 2015b). После предварительной обработки суспензию соломы пшеницы извлекали из циклонного сепаратора и разделяли на две фракции: жидкий гидролизат с высоким содержанием ксилозы и твердый остаток с высоким содержанием глюкана. Для удаления свободных сахаров и ингибиторов проводили тщательную промывку остатка SEWS примерно пятикратным количеством дистиллированной воды.Промытые SEWS хранили в герметичных пластиковых пакетах при 4 ° C до дальнейшего использования. Поскольку это индивидуальная пилотная установка, и мы разработали наш технологический процесс таким образом, чтобы иметь место минимальная задержка в достижении желаемой температуры и давления в течение 2 минут и почти мгновенное охлаждение до температуры / давления окружающей среды в течение нескольких секунд. Предварительная промывка реактора паром высокого давления (15 бар) также помогает сократить время задержки. Кроме того, ранее мы провели серию экспериментов и оптимизировали наш процесс.Исследование по оптимизации процессов было опубликовано ранее, и к нему можно обратиться за любыми подробностями (Sharma et al., 2015b).

Анализ

Анализ состава биомассы для определения целлюлазы, гемицеллюлоз, золы лигнина и экстрактивных веществ проводили с использованием стандартного аналитического протокола Sluiter et al. (2008). Олигомеры сахара оценивались методом, разработанным Национальной лабораторией возобновляемых источников энергии (NREL) (Sluiter et al., 2006, 2008). Весь анализ высокоэффективной жидкостной хроматографии проводился с помощью системы ВЭЖХ от Waters, США, оснащенной детектором показателя преломления (Модель No.2,414, Waters) и колонку Aminex HPX-87H с внутренним диаметром 300 × 7,8 мм (Bio-Rad Labs, Hercules, CA). Весь анализ проводился путем построения калибровочных кривых при различных концентрациях стандартов сахара высокой чистоты (D-целлобиоза, D — (+) глюкоза, D — (+) ксилоза, D — (+) галактоза, L — (+) арабиноза и D — (+) манноза) в ВЭЖХ (Sluiter et al., 2008). Протокол Миллера (1959) был использован для определения общего редуцирующего сахара с использованием глюкозы в качестве стандарта, а поглощение наблюдали при 540 нм. Все анализы были проведены в трех экземплярах и определено стандартное отклонение.

Активность ферментов и оценка белков

Стандартные процедуры анализа были использованы для определения активности ферментов, присутствующих в ферментных препаратах, используемых в этом исследовании. Активности целлюлазы, такие как BGL, блок фильтровальной бумаги (FPU) и эндоглюканаза, оценивали с помощью п-нитрофенил-бета-D-глюкозида (pNPG), фильтровальной бумаги и карбоксиметилцеллюлазы в качестве субстратов, соответственно (Ghose и Bisaria, 1979; Agrawal et al., 2013a, 2017a). Анализ ксиланазы, пектиназы и лакказы проводили с использованием ксилана овсянки, пектина и диаммониевой соли 2,2′-азинобис (3-этилбензотиазолин-6-сульфоновой кислоты) (ABTS) в качестве субстратов, как описано Ibrahim et al.(2014) и Zhao et al. (2014). Набор BCA-1, приобретенный у Sigma, США, использовался для оценки содержания белка во всех ферментах (Walker, 1994; Agrawal et al., 2012).

Развитие ферментного коктейля

Было проведено сравнение ферментативного гидролиза SEWS с основным препаратом целлюлазы, полученным из Trichoderma reesei (Celluclast), и его комбинацией с различными концентрациями (10–125 мг белка / г биомассы) дополнительных ферментов (BGL, ксиланаза, пектиназа и Laccase) в колбах Эрленмейера на 500 мл при 10% (мас. / Мас.) Загрузке твердого вещества в общем объеме 150 мл и pH поддерживали добавлением цитратного буфера натрия 0.05 (pH 4,8) (Agrawal et al., 2017b, c).

Процентный выход гидролиза был определен путем оценки общего количества восстанавливающих сахаров по следующей формуле (Satheeja Santhi et al., 2014):

Гидролиз (%) = Концентрация редуцирующего сахара (г) × 0,9 × 100

Содержание углеводов в биомассе (г)

Статистический подход к методологии поверхности отклика с центральным составным дизайном (CCD) с репликами в центре и звездочками использовался с Design-Expert (Stat-Ease, Inc., Миннеаполис, США) программное обеспечение для оптимизации коктейля / смеси ферментов (EnzMix). Уровни факторов для RSM приведены в таблице S1. Здесь Целлюкласт был частично заменен вспомогательными ферментами, и его влияние на выход гидролиза наблюдали с использованием метода, описанного в Agrawal et al. (2015b). Мы определили количество свободных сахаров, присутствующих в образцах коммерческих ферментов, и вычли это количество при расчете выхода гидролиза.

Сравнительный анализ коммерческих ферментных препаратов

Смесь ферментов собственной разработки (EnzMix) была протестирована с ее коммерчески доступными аналогами в тех же условиях (загрузка биомассы 10%, температура 50 ° C и 4.8 pH), сырья (SEWS) и концентрации, то есть 49 мг белка / г биомассы.

Результаты и обсуждение

Предварительная обработка пшеничной соломы и химический состав

Предварительная обработка измельченного WS-материала паровым взрывом (SE) проводилась при высокой температуре и давлении, обычно от 180 до 230 ° C (Ruiz et al., 2008), с внезапным выбросом пара в расширительном резервуаре. Это «автокаталитический» процесс, при котором уксусная кислота, высвобождаемая из гемицеллюлозы, и самоионизация воды при повышенных температурах вызывают падение pH, которое действует как катализатор (Sharma et al., 2015b). Сообщалось, что SE разрушает структуру биомассы и развивает поры для более высокой ферментативной доступности (van der Zwan et al., 2017). Во время SE большая часть гемицеллюлозы гидролизуется до растворимых сахарных мономеров, а некоторая часть целлюлазы также деполимеризуется в глюкозу, в то время как небольшая часть лигнина растворяется и / или перераспределяется (Kumar and Murthy, 2011; Agrawal et al., 2013b). Состав необработанной и предварительно обработанной пшеничной соломы показан на Рисунке 1.

Рисунок 1 .Состав предварительно обработанной и необработанной соломы пшеницы.

После предварительной обработки паровым взрывом наблюдалось увеличение содержания целлюлазы в SEWS примерно на 31% с небольшим увеличением лигнина (2%), однако содержание гемицеллюлозы было значительно снижено (11%) по сравнению с необработанной пшеничной соломой, и экстрактивные вещества были почти полностью удаленный. Ранее сообщалось, что после предварительной обработки рисовой соломы паром (180 ° C, 0,5% серная кислота и время пребывания 10 мин) содержание целлюлазы увеличивалось на 21%, а содержание гемицеллюлозы уменьшалось на 9% с небольшим увеличением лигнина ( 3%) (Sharma et al., 2015b). Kristensen et al. (2008) обнаружили, что после SE соломы пшеницы (190 ° C, 3,5% серной кислоты / биомассы и время пребывания 6 мин) содержание ксилана снизилось примерно до 17% по сравнению с природной биомассой. Следовательно, содержание целлюлазы увеличилось на 17%, а содержание лигнина увеличилось на 1%. В другом исследовании с использованием виноградной лозы сладкого картофеля в качестве субстрата содержание целлюлазы увеличилось с 17% (необработанная) до 40–49% (обработанная SE), что сопровождалось снижением «лигнина» с 43% до 20–25% и гемицеллюлозы с 10%. до 16% (Лю и др., 2017).

Анализ различных ферментных препаратов

Был проведен сравнительный анализ различных ферментных препаратов, который показан в таблице 1. И Cellulclast, и BGL были доступны в жидкой форме и содержали почти одинаковое содержание белка, тогда как ксиланаза присутствовала в твердой форме и содержала меньшее количество белка. Максимальная активность целлюлазы (FPU) была обнаружена в Cellulclast, за ней следовало менее половины в BGL и незначительная активность в других вспомогательных ферментах. Это показало, что вспомогательные ферменты обладают очень низким целлюлолитическим потенциалом.Пектиназа и лакказа имели удельную активность 3785 Ед / мл и 83 Ед / г соответственно.

Таблица 1 . Анализ коммерческих ферментных препаратов.

SEWS Гидролиз

Гидролиз с Celluclast

Быстрое увеличение гидролиза наблюдалось при увеличении концентрации Целлюкласта с 10 до 25 мг белка / г биомассы, но только незначительное увеличение наблюдалось при высокой дозировке белка (более 40 мг белка / г биомассы) (Рисунок S1). Он показал, что даже очень высоких доз целлюлазы недостаточно для достижения высокого гидролиза.Подобно приведенным выше результатам, Hu et al. (2011) сообщили, что выходы гидролиза линейно увеличивались с дозировкой Целлюкласта до 35 мг / г и доходили до стационарной фазы, после которой не было обнаружено существенного увеличения выше этой дозировки. Это может быть связано с меньшим количеством дополнительных ферментов в Целлюкласте.

Эффект дополнения Целлюкласта дополнительными ферментами

Поскольку концентрация целлюкласта 10 мг белка / г биомассы достаточна для достижения 60% выхода гидролиза SEWS за 24 часа, она использовалась в качестве базового уровня для любого дальнейшего улучшения путем добавления дополнительных ферментов.Основная цель этого эксперимента — определить количество дополнительных ферментов для получения не менее 80% выхода гидролиза. Результаты показали, что добавление даже небольшого количества BGL (10 мг белка) в Celluclast достаточно для достижения гидролиза> 80%, и не было обнаружено дальнейшего существенного увеличения при увеличении дозы BGL через 48 часов (Рисунки 2A – C). Добавление Celluclast с BGL в дозе 10 мг белка увеличивало гидролиз биомассы на 34% через 6 часов. Берлин и др. (2007) также сообщили, что гидролиз кукурузной соломы был улучшен на 37% за счет добавки BGL.

Рисунок 2 . Добавление в Celluclast β-глюкозидазы (A – C) и ксиланазы (D – F) . Соответствующее время гидролиза для (A, D) , (B, E) и (C, F) составляет 6, 24 и 48 часов соответственно.

Постепенное увеличение выхода гидролиза также наблюдалось при увеличении концентрации ксиланазы с 1 мг белка до 30 мг / г биомассы (рисунки 2D – F). Было обнаружено, что увеличение на 15% наблюдалось при низкой дозировке ксиланазы (1 мг белка).Результаты также показывают, что для достижения максимального выхода гидролиза за минимальное время требуется более высокая концентрация ксиланазы, например, для достижения 80% гидролиза за 6 часов требуется 30 мг ксиланазы, но 10 мг ксиланзы достаточно для достижения> 95% гидролиза за 48 часов. В предыдущих отчетах также обсуждалось, что при добавлении ксиланазы наблюдалось значительное увеличение выхода гидролиза предварительно обработанной паром кукурузной соломы (16%) и баггазы сахарного тростника (31%) (Hu et al., 2011; Li et al., 2014). Удивительно, но пектиназа и лакказа показали отрицательный эффект на гидролиз SEWS (данные не показаны), поэтому для дальнейшей оптимизации в этом исследовании были выбраны только BGL и ксиланаза.Отрицательный эффект пектиназы и лакказы может быть связан с интенсивной конкуренцией между ферментами за сайты связывания целлюлазы и небольшим ингибированием активности β-глюкозидазы. Недавно Oliva-Taravilla et al. (2014) сообщили, что относительное извлечение глюкозы в присутствии лакказы с целлюлозным субстратом (Sigmacell и пшеничная солома, взорванная паром) было почти на 10% ниже, чем в отсутствие лакказы. Ян и др. (2016) сообщили, что соотношение и взаимодействие целлюлаз имеют решающее значение в гидролизе, и эффективность может быть дополнительно улучшена после добавления дополнительных ферментов, таких как оксидоредуктазы, экспансии, пул бактериальных ферментов которых настолько велик, чтобы их можно было выкопать в будущем (Agrawal et al. al., 2015г).

Синергетическое сотрудничество ферментов

Степень синергизма (DS) использовалась для выяснения синергетического взаимодействия целлюлаз и дополнительных ферментов для повышения выходов гидролиза биомассы. Его рассчитывали как долю выхода гидролиза, полученного с синергической смесью ферментов, к сумме выхода гидролиза, достигнутого с соответствующими ферментами, при использовании по отдельности в тех же количествах, что и в смеси (Li et al., 2014). Максимальный синергизм был обнаружен между Целлюкластом и β-глюкозидазой (1.68), а затем ксиланаза (1,36) (рис. 3). Эти результаты показывают, что добавление β-глюкозидазы и ксиланаз существенно усиливает гидролизующую способность целлюлаз, и максимальный синергизм достигается через 6 часов гидролиза и со временем снижается. Причина этого может заключаться в том, что скорость гидролиза в первые часы находится в логарифмической фазе, когда наблюдается максимальный эффект фермента. Аналогичным образом, в предыдущем отчете предполагалось, что между целлюкластом и ксиланазой была обнаружена высокая DS (1,05–1,19) при гидролизе взорванного паром жома сахарного тростника (Li et al., 2014). В другом отчете сообщалось о 1,43 DS в оптимизированной смеси ферментов, содержащей целлюлазу, ксиланазу и пектиназу (Bunterngsook et al., 2017). Недавно опубликованный отчет также предположил, что лучшая DS наблюдалась на начальной стадии гидролиза, но снижалась на более поздней стадии гидролиза (Huang et al., 2018). Кроме того, было замечено, что усвояемость целлюлазы повышалась с усвояемостью ксилана при гидролизе предварительно обработанных субстратов жома сахарного тростника (Huang et al., 2018). Точно так же добавление коммерческой целлюлазы (Sigma-Aldrich, США) с BGL сравнивалось с гидролизом микрокристаллической целлюлазы, нативной кукурузной соломы и предварительно обработанной паром кукурузной соломы, и результаты показали увеличение высвобождения глюкозы на 62, 94 и 95% соответственно. (Zhang et al., 2017).

Рисунок 3 . Степень синергизма между Целлюкластом и вспомогательными ферментами.

Оптимизация ферментного коктейля

Оптимизацию ферментного коктейля проводили с использованием статистического инструмента, известного как методология поверхности отклика.Поскольку только два фермента, а именно β-глюкозидаза и ксиланаза, проявили синергизм с целлюкластом; эти два были использованы для дальнейшей разработки ферментного коктейля. Схема эксперимента и результаты экспериментов показаны в Таблице S1. Уравнения (1) и (2) отображают корреляцию между значимыми переменными и откликом, т. Е. Гидролизом через 6 и 24 часа.

% гидролиза (6 ч) = 79,39 + 2,38 * A + 17,11 * B — 0,76 * AB — 4,17 * A ² — 0,44 * B ² (1)

% гидролиза (24 ч) = 84.81 + 4,94 * A + 15,68 * B — 3,20 * AB — 4,47 * A ² — 2,56 * B ² (2)

Где A — это BGL, а B — концентрация ксиланазы в пересчете на мг / г белка биомассы.

Эта модель оказалась статистически значимой, поскольку значение p для 6 часов (<0,0001) и 24 часов (0,00) гидролиза было больше, чем α = 0,05. ANOVA использовали для оценки влияния переменных и их взаимодействия в течение 6 и 24 часов осахаривания (таблицы S2A, B). Условия модели (A, B и A2) были значимыми как для 6-часового, так и для 24-часового периодов.Эту модель можно использовать для навигации по пространству проектирования, поскольку прогнозируемое значение R ² соответствовало скорректированному значению R ² . Также адекватное значение точности, которое измеряет отношение сигнал / шум, было выше порогового значения 4 для 6-часовой (18,1) и 24-часовой (19,8) моделей.

Как предсказано моделью и подтверждено экспериментами, 80% гидролиз SEWS наблюдался при использовании очень большого количества Celluclast (> 100 мг белка / г биомассы).Но частичная замена целлюкласта небольшими количествами дополнительных ферментов [целлюкласт (10 мг), BGL (18,83 мг) и ксиланаза (20,17 мг)], определенная с помощью статистической модели RSM, помогает улучшить выходы гидролиза SEWS до 95% при низком уровне общего белка (49 мг) (Рисунок S1). Предыдущий отчет также предполагает, что частичная замена целлюлазы дополнительными ферментами, такими как BGL и ксиланаза, улучшила гидролиз предварительно обработанной пшеничной соломы до 80% по сравнению с одной целлюлазой (Qing and Wyman, 2011).

Чтобы выяснить причину этого существенного увеличения, ферментативный гидролизат после гидролиза был оценен для определения концентраций ингибиторов, таких как целлобиоза и олигомеры. Результаты показывают, что 2,3% целлобиозы и олигомеров присутствовали после гидролиза одним целлюкластом, в то время как их концентрация была снижена с помощью EnzMix (рис. 4). Ранее сообщалось, что присутствие даже небольших количеств олигомерных сахаров и целлобиозы действует как сильные ингибиторы ферментов (Rajan and Carrier, 2014; Resch et al., 2014; Zhai et al., 2016). Qing et al. (2010) сообщили, что 0,2–1% олигомеров могут вызывать снижение выхода гидролиза на 15–38%.

Рисунок 4 . Сравнение гидролиза соломы пшеницы, предварительно обработанной паром, с помощью EnzMix и Celluclast.

Интересным открытием этого исследования было различие, наблюдаемое между оптимизированными композициями ферментного коктейля, основанными на различных методах предварительной обработки одного и того же сырья. В предыдущем исследовании оптимизированный коктейль, разработанный для соломы пшеницы, предварительно обработанной разбавленной кислотой, состоял из целлюкласта (10 мг), бета-глюкозидазы (25 мг), ксиланазы (4 мг), пектиназы (3.25 мг) и лакказы (8 мг) (Agrawal et al., 2015b). Однако коктейль из пшеничной соломы, взорванной паром, состоит из целлюкласта (10 мг), β-глюкозидазы (18,83 мг) и ксиланазы (20,17 мг). Он показал, что для предварительной обработки разбавленной кислотой требуется немного большее количество фермента (50,25 мг) по сравнению с паровым взрывом (49 мг). Другое важное наблюдение состоит в том, что пектиназа и лакказа улучшили выходы гидролиза при предварительной обработке разбавленной кислотой, но эти ферменты оказали отрицательное влияние во время ферментативного гидролиза предварительно обработанной паром соломы пшеницы.Это может быть связано с эффективным разрушением структуры клеточной стенки соломы пшеницы и лигнин-углеводных связей посредством предварительной обработки паровым взрывом в условиях высокой температуры и давления, в то время как предварительная обработка разбавленной кислотой в основном зависит от удаления гемицеллюлозы в условиях относительно низких температуры и давления.

Синергизм между целлюкластом и вспомогательными ферментами

Чтобы установить синергетическое действие между Целлюкластом и другими вспомогательными ферментами, была определена фактическая активность фермента в реакционной смеси Целлюкласта с вспомогательными ферментами и проведено сравнение с теоретической суммой ферментных активностей (FPU, CMCase, BGL и ксиланаза), присутствующих в смеси .Если фактическая активность ферментов в реакционной смеси превышает сумму теоретических активностей, это называется синергетическим эффектом (Hu et al., 2013), в противном случае это аддитивный эффект. Как показано в Таблице 2, было обнаружено, что фактическая активность ферментов больше, чем добавление отдельных ферментов. Это доказывает, что Celluclast и вспомогательные ферменты работают синергетически. Наибольший синергизм был обнаружен в EnzMix, где активность BGL была увеличена в 15,5 раз, а затем CMCase и FPU в 6 раз.4 и 6 раз и ксиланаза в 4 раза соответственно. В аналогичном отчете (Adsul et al., 2014) показано, что активность FPU и CMCase была увеличена в 1,3 и 2 раза.

Таблица 2 . Синергизм между Целлюкластом и вспомогательными ферментами.

Сравнительный анализ коммерческих ферментных препаратов

Гидролиз пшеничной соломы, предварительно обработанной паром, с помощью EnzMix, содержащего целлюкласт, β-глюкозидазу и ксиланазу в соотношении белков 20,40: 38,43: 41,16 соответственно, и коммерческие образцы ферментов сравнивали с аналогичной концентрацией субстрата и белка (т.е., 49 мг белка / г биомассы), как в EnzMix (рис. 5). Наивысшие выходы гидролиза (> 95%) были получены с Cellic и EnzMix. Это исследование показало, что 82% выхода гидролиза было получено с 125 мг белка / г биомассы целлюкласта; только 49 мг / г белка EnzMix требовалось для получения 99% выходов. Таким образом, для достижения высоких выходов гидролиза как с EnzMix, так и с Cellic требовалось только 16% от общей стоимости белка фермента, но стоимость белка была существенно увеличена до 42% с помощью субоптимизированного фермента, такого как Celluclast и других низших ферментов.Это сравнение было основано на предположении, что коммерческая стоимость белка фермента целлюлазы осталась прежней, в то время как их эффективность могла варьироваться в зависимости от типа его компонентов.

Рисунок 5 . Сравнительный анализ коммерческих ферментов с помощью EnzMix с использованием предварительно обработанной паром пшеничной соломы в тех же условиях.

Выводы

Это исследование установило, что вспомогательные ферменты играют синергетическую и критическую роль в ферментативном гидролизе лигно-целлюлозной биомассы.Разработка ферментного коктейля на основе свойств субстрата и предварительной обработки является устойчивым подходом к снижению концентрации фермента, необходимой для получения высоких выходов гидролиза. Разработанный собственными силами (EnzMix) оказался по номиналу или лучше, чем его коммерческие аналоги.

Авторские взносы

RA и AS выполнили исследование, анализ данных и подготовили рукопись. СС и РК планировали и проводили эксперименты по предварительной обработке. AS, RG и DT проанализировали данные и приняли участие в редактировании рукописи.Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Заявление о конфликте интересов

RA, SS, RK, AM, RG, DT и AS работали в Центре передовых биоэнергетических исследований DBT-IOC, Indian Oil Corporation Ltd., Харьяна, Индия.

Благодарности

Инфраструктура и аналитическая поддержка со стороны IOCL R&D заслуживают признания наряду с финансовой помощью DBT, Индия. Большое спасибо производителям ферментов за предоставление образцов.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fenrg.2018.00122/full#supplementary-material

Сокращения

EnzMix, смесь ферментов; DS — степень синергизма; WS — пшеничная солома; ЧЭ, паровой взрыв; SEWS, солома пшеницы, прошедшая предварительную обработку паром; SS, нержавеющая сталь; BGL, активность β-глюкозидазы; ФПУ, блок фильтровальной бумаги; CMCase, эндоглюканаза, CCD, центральная композитная конструкция.

Список литературы

Adsul, M., Sharma, B., Singhania, R.R., Saini, J.K., Sharma, A., Mathur, A., et al. (2014).Смешивание препаратов целлюлолитических ферментов из различных грибковых источников для улучшения гидролиза целлюлозы за счет увеличения синергизма. RSC Adv. 4, 44726–44732. DOI: 10.1039 / c4ra08129c

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Агравал Р., Сатлевал А., Чаудхари М., Верма А., Сингх Р., Верма А. К. и др. (2012). Быстрое обнаружение устойчивых к кадмию ризобактерий, стимулирующих рост растений: перспективы иммуноферментного анализа на основе ELISA и QCM. J. Microbiol.Биотехнология . 22, 849–855. DOI: 10.4014 / jmb.1108.08055

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Агравал, Р., Сатлевал, А., Гаур, Р., Аншу, М., Кумар, Р., Гупта, Р. П. и др. (2015b). Улучшенное осахаривание пилотной пшеничной соломы, предварительно обработанной кислотой, за счет использования синергетического поведения ферментов, разрушающих лигноцеллюлозу. RSC Adv . 5, 71462–71471. DOI: 10.1039 / c5ra13360b

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Агравал, Р., Satlewal, A., Gaur, R., Mathur, A., Kumar, R., Gupta, R.P., et al. (2015c). Предварительная обработка соломы пшеницы в пилотном масштабе и сравнительная оценка коммерческих ферментных препаратов для осахаривания и ферментации биомассы. Biochem. Англ. J . 102, 54–61. DOI: 10.1016 / j.bej.2015.02.018

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Агравал, Р., Сатлевал, А., Капур, М., Мондал, С., и Басу, Б. (2017b). Исследование связывания фермента и лигнина с поверхностно-активными веществами для улучшения осахаривания предварительно обработанной соломы пшеницы в пилотном масштабе. Биоресурсы. Технол . 224, 411–418. DOI: 10.1016 / j.biortech.2016.11.026

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Агравал Р., Сатлевал А., Матур А. С., Гупта Р. П., Радж Т., Кумар Р. и др. (2014). Исследования кинетики и рециклинга ферментов иммобилизованной β-глюкозидазы для гидролиза лигноцеллюлозной биомассы. Environ. Англ. Manag. J. 17, 1–6.

Google Scholar

Агравал, Р., Сатлевал, А., Шарма, Б., Матур, А., Гупта Р., Тули Д. и др. (2017c). Индукция целлюлаз дисахаридами или их производными у мутанта Penicillium janthinellum EMS-UV-8. Биотопливо 8, 615–622. DOI: 10.1080 / 17597269.2016.1242692

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Агравал Р., Сатлевал А. и Варма А. (2015d). «Характеристика ризобактерий, способствующих росту растений (PGPR): перспектива традиционных методов по сравнению с современными», в Загрязнение почв тяжелыми металлами: мониторинг и восстановление , ред.Ирена и В. Аджит (Базель: издательство Springer International), 471–485.

Google Scholar

Агравал Р., Сатлевал А. и Верма А. (2013b). Развитие мутанта-гиперпродуцента β-глюкозидазы путем комбинированного химического и УФ-мутагенеза. 3 Biotech 3, 381–388. DOI: 10.1007 / s13205-012-0095-z

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Агравал Р., Сатлевал А. и Верма А. К. (2013a). Производство внеклеточной целлобиазы при твердофазной ферментации. J. Microbiol. Biotechnol. Food Sci . 2, 2339–2350.

Google Scholar

Агравал Р., Сатлевал А. и Верма А. К. (2017a). Использование отходов Citrus sinensis для производства β-глюкозидазы путем твердофазной ферментации с использованием мутанта Bacillus subtilis. Environ. Англ. Manag. J . 16, 1465–1471.

Google Scholar

Альварес, К., Гонсалес, А., Негро, М. Дж., Баллестерос, И., Олива, Дж. М., и Саес, Ф. (2017). Оптимизированное использование гемицеллюлозы на заводе биопереработки для переработки ксилоолигосахаридов с высокой добавленной стоимостью. Ind. Crops Prod . 99 (Дополнение C), 41–48. DOI: 10.1016 / j.indcrop.2017.01.034

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Берлин А., Максименко В., Гилкс Н. и Сэддлер Дж. (2007). Оптимизация ферментных комплексов для гидролиза лигноцеллюлозы. Biotechnol. Bioeng . 97, 287–296. DOI: 10.1002 / бит. 21238

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бойс, А., Уолш, Г. (2018). Очистка и характеристика термостабильной β-ксилозидазы из aspergillus niger van tieghem для потенциального применения в производстве лигноцеллюлозного биоэтанола. Заявл. Biochem. Биотехнология . 186, 712–730. DOI: 10.1007 / s12010-018-2761-z

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Bunterngsook, B., Laothanachareon, T., Natrchalayuth, S., Lertphanich, S., Fujii, T., Inoue, H., et al. (2017). Оптимизация минимальной синергетической ферментной системы для гидролиза сырой мякоти маниоки. RSC Adv . 7, 48444–48453. DOI: 10.1039 / c7ra08472b

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чундават, С.П. С., Уппугундла, Н., Гао, Д., Курран, П. Г., Балан, В., и Дейл, Б. Э. (2017). Ружейный подход к увеличению выхода ферментативного осахаривания предварительно обработанной целлюлозной биомассы из аммиачных волокон. Фронт. Энергетическое сопротивление . 5: 9. DOI: 10.3389 / fenrg.2017.00009

CrossRef Полный текст | Google Scholar

де Оливейра Родригес, П., де Касия Перейра, Дж., Душ Сантуш, Д. К., Алвес Гургель, Л. В., Паскини, Д., и Баффи, М. А. (2017). Синергетическое действие Aspergillus (геми) целлюлолитического консорциума на осахаривание жома сахарного тростника. Ind. Crops Prod . 109 (Дополнение C), 173–181. DOI: 10.1016 / j.indcrop.2017.08.031

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Франко, Б., Карлквист, К., Гальбе, М., Лиден, Г., и Валлберг, О. (2018). Удаление водорастворимых экстрактивных веществ улучшает ферментативную перевариваемость предварительно обработанной паром коры мягкой древесины. Заявл. Biochem. Биотехнология . 184, 599–615. DOI: 10.1007 / s12010-017-2577-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гхош, Т.К. и Бисария В. С. (1979). Исследования механизма ферментативного гидролиза целлюлозных веществ. Biotechnol. Bioeng . 21, 131–146.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Gonçalves, G.A.L., Takasugi, Y., Jia, L., Mori, Y., Noda, S., Tanaka, T., et al. (2015). Синергетический эффект и применение ксиланаз в качестве дополнительных ферментов для усиления гидролиза предварительно обработанного жома. Enzyme Microb. Технол . 72, 16–24. DOI: 10.1016 / j.enzmictec.2015.01.007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ху Дж., Арантес В., Прибово А. и Сэддлер Дж. Н. (2013). Синергетическое действие дополнительных ферментов увеличивает гидролитический потенциал смеси целлюлаз, но имеет высокую специфичность к субстрату. Biotechnol. Биотопливо 6: 112. DOI: 10.1186 / 1754-6834-6-112

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ху, Дж., Арантес, В., и Сэддлер, Дж. Н. (2011). Усиление ферментативного гидролиза лигноцеллюлозных субстратов за счет добавления дополнительных ферментов, таких как ксиланаза: это аддитивный или синергетический эффект? Biotechnol.Биотопливо 4, 36–49. DOI: 10.1186 / 1754-6834-4-36

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хуанг, К., Чжао, К., Ли, Х., Сюн, Л., Чен, X., Луо, М., и др. (2018). Сравнение различных предварительных обработок на синергетический эффект целлюлазы и ксиланазы во время ферментативного гидролиза жома сахарного тростника. RSC Adv . 8, 30725–30731. DOI: 10.1039 / c8ra05047c

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ибрагим, Д., Велосами, Х., и Шех-Хонг, Л.(2014). Возможное использование нейлонового метода прикрепления кубиков губки для производства пектиназы с помощью Aspergillus niger HFD5A-1. Процесс Биохим . 49, 660–667. DOI: 10.1016 / j.procbio.2014.01.012

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Жаке, Н., Маниет, Г., Вандергем, К., Дельвин, Ф. и Ришель, А. (2015). Применение парового взрыва в качестве предварительной обработки лигноцеллюлозного материала: обзор. Ind. Eng. Chem. Res . 54, 2593–2598. DOI: 10.1021 / ie503151g

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Янзон, Р., Шутт, Ф., Ольденбург, С., Фишер, Э., Корнер, И., и Сааке, Б. (2014). Предварительная обработка остатков елового леса паром: оптимальные условия для производства биогаза и ферментативного гидролиза. Carbohydr. Полим . 100, 202–210. DOI: 10.1016 / j.carbpol.2013.04.093

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кейн, С. Д., и Френч, К. Э. (2018). Характеристика новых ферментов деградации биомассы из генома Cellulomonas fimi . Enzyme Microb. Технол . 113, 9–17. DOI: 10.1016 / j.enzmictec.2018.02.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кристенсен, Дж. Б., Тайгесен, Л. Г., Фелби, К., Йоргенсен, Х., и Элдер, Т. (2008). Структурные изменения клеточной стенки в пшеничной соломе, предварительно обработанной для производства биоэтанола. Biotechnol. Биотопливо 1, 1–5. DOI: 10.1186 / 1754-6834-1-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кумар Д. и Мурти Г.С. (2011). Влияние технологий предварительной обработки и последующей обработки на экономику и энергию при производстве целлюлозного этанола. Biotechnol. Биотопливо 4:27. DOI: 10.1186 / 1754-6834-4-27

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, Х., Ли, Ю. М., Хео, Ю. М., Ли, Дж., Ким, Дж. С., Кан, К. Ю. и др. (2017). Использование сельскохозяйственных остатков для увеличения продукции целлюлолитических ферментов и ферментативного осахаривания с помощью Trichoderma harzianum KUC1716. Ind. Crops Prod . 109 (Дополнение C), 185–191. DOI: 10.1016 / j.indcrop.2017.08.042

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Li, J., Zhou, P., Liu, H., Xiong, C., Lin, J., Xiao, W., et al. (2014). Синергизм целлюлазы, ксиланазы и пектиназы при гидролизе жома сахарного тростника, полученного в результате различных технологий предварительной обработки. Биоресурсы. Технол . 155, 258–265. DOI: 10.1016 / j.biortech.2013.12.113

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лю, Л.-Y., Qin, J.-C., Li, K., Mehmood, M.A., and Liu, C.-G. (2017). Влияние влажности на предварительную обработку виноградной лозы батата моментальным катапультовым паровым взрывом. Биоресурсы. Биопроцесс . 4:49. DOI: 10.1186 / s40643-017-0179-z

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ломан А.А., Джу Л.-К. (2016). К полному гидролизу углеводов соевой муки смесями ферментов для обогащения белков: подход к моделированию. Enzyme Microb. Технол . 86, 25–33.DOI: 10.1016 / j.enzmictec.2016.01.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Миллер, Г. Л. (1959). Использование реактива динитросалициловой кислоты для определения редуцирующего сахара. Анал. Chem. 31, 426–428.

Google Scholar

Олива-Таравилла, А., Морено, А. Д., Демуэс, М., Ибарра, Д., Томас-Пехо, Э., Гонсалес-Фернандес, К., и др. (2014). Выявление влияния обработки лакказой на ферментативный гидролиз паровой взрыва пшеничной соломы. Биоресурсы. Технол . 175, 209–215. DOI: 10.1016 / j.biortech.2014.10.086

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Парнтонг, Дж., Кунгсанант, С., и Чавадедж, С. (2018). Влияние адсорбции неионных ПАВ на ферментативный гидролиз грозди плодов масличной пальмы. Заявл. Biochem. Биотехнология . 186, 895–908. DOI: 10.1007 / s12010-018-2783-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пенджилли, К., Гарсия-Апарисио, М. П., Дидерикс, Д., и Горгенс, Дж. Ф. (2016). Оптимизация ферментативного гидролиза соломы тритикале, предварительно обработанной паром. BioEnergy Res . 9, 851–863. DOI: 10.1007 / s12155-016-9741-3

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пилхоп Т., Амгартен Дж., Фон Рор П. Р. и Штудер М. Х. (2016). Предварительная обработка древесины мягких пород паровым взрывом: влияние взрывной декомпрессии на ферментативную усвояемость. Biotechnol. Биотопливо . 9: 152.DOI: 10.1186 / s13068-016-0567-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пирс, Б. К., Аггер, Дж. У., Вичманн, Дж., И Мейер, А. С. (2017). Окислительное расщепление и гидролитическое усиление целлюлозы в отработанных хлопьях сои под действием Trichoderma reesei Cel61A литической полисахаридмонооксигеназой. Enzyme Microb. Технол . 98, 58–66. DOI: 10.1016 / j.enzmictec.2016.12.007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Цин, Q., и Вайман, К. (2011). Добавление ксиланазы и бета-ксилозидазы для уменьшения ингибирования ксилоолигомером и ксиланом ферментативного гидролиза целлюлозы и предварительно обработанной кукурузной соломы. Biotechnol. Биотопливо 4, 18–30. DOI: 10.1186 / 1754-6834-4-18

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Qing, Q., Yang, B., and Wyman, C.E. (2010). Ксилоолигомеры — сильные ингибиторы гидролиза целлюлозы ферментами. Биоресурсы. Technol. 101, 9624–9630.DOI: 10.1016 / j.biortech.2010.06.137

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Раджан, К., и Кэрриер, Д. Дж. (2014). Характеристика предгидролизатов рисовой соломы и их влияние на гидролиз модельных субстратов с использованием коммерческого коктейля эндо-целлюлазы, β-глюкозидазы и целлюлазы. ACS Sustain. Chem. Eng . 2, 2124–2130. DOI: 10.1021 / sc5002947

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Реш, М.Г., Донохо, Б. С., Чесельски, П. Н., Нилл, Дж. Э., Магнуссон, Л., Химмель, М. Е. и др. (2014). Предварительная обработка чистым фракционированием снижает загрузку ферментов для осахаривания биомассы и раскрывает механизм синергии свободных и целлюлосомных ферментов. ACS Sustain. Chem. Англ. 2, 1377–1387. DOI: 10.1021 / sc500210w

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Руис, Э., Кара, К., Мансанарес, П., Баллестерос, М., и Кастро, Э. (2008). Оценка предварительной обработки паровым взрывом для ферментативного гидролиза стеблей подсолнечника. Enzyme Microb. Технол . 42, 160–166. DOI: 10.1016 / j.enzmictec.2007.09.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Руис, Х. А., Родригес-Хассо, Р. М., Фернандес, Б. Д., Висенте, А. А., и Тейшейра, Дж. А. (2013). Гидротермальная обработка, как альтернатива для повышения качества сельскохозяйственных остатков и морской биомассы в соответствии с концепцией биопереработки: обзор. Обновить. Поддерживать. Энергия Ред. . 21, 35–51. DOI: 10.1016 / j.rser.2012.11.069

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Руис, Х.А., Томсен, М. Х., Траяно, Х. Л. (2017). Гидротермальная переработка на биоперерабатывающих заводах: производство биоэтанола и соединений с высокой добавленной стоимостью из биомассы второго и третьего поколения . Берлин: Springer.

Google Scholar

Санчес-Канту, М., Ортис-Морено, Л., Рамос-Касселлис, М. Э., Марин-Кастро, М., и Де ла Серна-Эрнандес, К. (2018). Твердотельная обработка клещевины ферментным коктейлем, произведенным из грибов Pleurotus djamor . Заявл. Biochem. Биотехнология . 185, 434–449. DOI: 10.1007 / s12010-017-2656-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сануэза К., Карвахаль Г., Сото-Агилар Дж., Лиенкео М. Э. и Салазар О. (2018). Влияние литической полисахаридмонооксигеназы и ксиланазы из Gloeophyllum trabeum на ферментативный гидролиз лигноцеллюлозных остатков с использованием коммерческой целлюлазы. Enzyme Microb. Технол . 113, 75–82. DOI: 10.1016 / j.enzmictec.2017.11.007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шанти, В. С., Бхагат, А. К., Саранья, С., Говиндараджан, Г., и Джебакумар, С. Р. Д. (2014). Морские водоросли ( Eucheuma cottonii ), ассоциированные с микроорганизмами, являются универсальным источником ферментов для обработки лигноцеллюлозной биомассы. Внутр. Биодетер Биодегр . 96, 144–151. DOI: 10.1016 / j.ibiod.2014.08.007

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сатлевал, А., Агравал, Р., Бхагия, С., Дас, П., и Рагаускас, А. Дж. (2018a). Рисовая солома как сырье для биотоплива: доступность, стойкость и химические свойства. Биотопливо Биопрод. Биорефин . 12, 83–107. DOI: 10.1002 / bbb.1818

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сатлевал А., Агравал Р., Бхагия С., Сангоро Дж. И Рагаускас А. Дж. (2018b). Природные глубокие эвтектические растворители для предварительной обработки лигноцеллюлозной биомассы: последние разработки, проблемы и новые возможности. Biotechnol. Adv . DOI: 10.1016 / j.biotechadv.2018.08.009. [Epub перед печатью].

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сатлевал, А., Сайни, Дж. К., Агравал, Р., Матур, А., Тули, Д. К., и Адсул, М. (2017). «Прогресс в области биотоплива в Индии, выбросы парниковых газов и сокращение выбросов парниковых газов за счет биотоплива: сравнительная оценка с мировыми», в Устойчивое развитие биотоплива в Индии, , ред. К. Анудж Чандель и К. Раджив Сукумаран (Чам: Springer International Publishing), 541–557.

Google Scholar

Сатлевал А., Сони Р., Заиди М., Шуш Ю. и Гоэль Р. (2008). Сравнительное биоразложение HDPE и LDPE с использованием местного микробного консорциума. J. Microbiol. Biotechnol. 18, 477–482.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Шарма Б., Агравал Р., Сингхания Р. Р., Сатлевал А., Матур А., Тули Д. и др. (2015a). Необработанная пшеничная солома: потенциальный источник секреции разнообразных целлюлолитических ферментов мутантом EMS-UV-8 Penicillium janthinellum. Биоресурсы. Technol. 196, 518–524. DOI: 10.1016 / j.biortech.2015.08.012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шарма, Н. К., Бехера, С., Арора, Р., и Кумар, С. (2017). Эволюционная адаптация Kluyveromyces marxianus NIRE-K3 для повышенного использования ксилозы. Фронт. Энергетическое сопротивление . 5:32. DOI: 10.3389 / fenrg.2017.00032

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шарма С., Кумар Р., Гаур Р., Агравал, Р., Гупта, Р. П., Тули, Д. К. и др. (2015b). Экспериментальное исследование парового взрыва и баланса массы для повышения извлечения сахара из рисовой соломы. Биоресурсы. Технология . 175, 350–357. DOI: 10.1016 / j.biortech.2014.10.112

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Слэйтер А., Хамес Б., Руис Р., Скарлата К., Слэйтер Дж. И Темплтон Д. (2006). Определение сахаров, побочных продуктов и продуктов разложения в образцах жидких фракций .Лабораторная аналитическая процедура от команды Национальной лаборатории по технологиям анализа биомассы возобновляемых источников энергии (NREL BAT).

Слэйтер А., Хамес Б., Руис Р., Скарлата К., Слэйтер Дж., Темплтон Д. и др. (2008). Определение структурных углеводов и лигнина в биомассе . Лабораторная аналитическая процедура от команды Национальной лаборатории по технологиям анализа биомассы возобновляемых источников энергии (NREL BAT).

Сулеймани, С., и Ранаи-Сиадат, С.-О. (2017). Приготовление и оптимизация коктейля из целлюлазы для улучшения процесса биоэтанола. Биотопливо 8, 291–296. DOI: 10.1080 / 17597269.2016.1224293

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Sun, S.-N., Cao, X.-F., Li, H.-Y., Xu, F., and Sun, R.-C. (2014). Структурная характеристика остаточных гемицеллюлоз из предварительно обработанного гидротермальным способом волокна эвкалипта. Внутр. J. Biol. Макромол . 69 (Дополнение C), 158–164. DOI: 10.1016 / j.ijbiomac.2014.05.037

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Такано М. и Хосино К.(2018). Производство биоэтанола из рисовой соломы путем одновременного осахаривания и ферментации со статистически оптимизированным коктейлем целлюлазы и ферментирующим грибком. Биоресурсы. Биопроцесс . 5:16. DOI: 10.1186 / s40643-018-0203-y

CrossRef Полный текст | Google Scholar

ван дер Цван, Т., Ху, Дж., И Сэддлер, Дж. Н. (2017). Механистическое понимание стадии разжижения ферментно-опосредованной деконструкции биомассы. Biotechnol. Bioeng . 114, 2489–2496. DOI: 10.1002 / бит. 26381

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Уокер, Д. Дж., Галлахер, Дж., Уинтерс, А., Сомани, А., Равелла, С. Р., и Брайант, Д. Н. (2018). Оптимизация технологического процесса параметров парового взрыва на множественной лигноцеллюлозной биомассе с использованием метода Тагучи — критическая оценка. Фронт. Энергетическое сопротивление . 6:46. DOI: 10.3389 / fenrg.2018.00046

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ван, М., и Лу, X. (2016). Изучение синергизма между целлобиозодегидрогеназой из phanerochaete chrysosporium и целлюлазой из Trichoderma reesei . Фронт. Микробиол . 7: 620. DOI: 10.3389 / fmicb.2016.00620

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Wu, Y., Sun, X., Xue, X., Luo, H., Yao, B., Xie, X., et al. (2017). Сверхэкспрессия ключевых компонентов пути секреции для усиления секреции глюкозооксидазы Aspergillus niger в Trichoderma reesei . Enzyme Microb. Технол . 106, 83–87. DOI: 10.1016 / j.enzmictec.2017.07.007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ян, М., Zhang, K.-D., Zhang, P.-Y., Zhou, X., Ma, X.-Q., et al. (2016). В синергетическом гидролизе целлюлозы преобладает многомодульная процессивная эндоглюканаза из clostridium cellulosi. Фронт. Микробиол . 7: 932. DOI: 10.3389 / fmicb.2016.00932

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чжай Р., Ху Дж. И Сэддлер Дж. Н. (2016). Какие основные компоненты предварительно обработанной паром лигноцеллюлозной биомассы снижают эффективность смесей ферментов целлюлазы? ACS Sustain.Chem. Eng . 4, 3429–3436. DOI: 10.1021 / acssuschemeng.6b00481

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhang, Z., Wang, M., Gao, R., Yu, X., and Chen, G. (2017). Синергетический эффект термостабильной β-глюкозидазы TN0602 и целлюлазы на гидролиз целлюлозы. 3 Biotech 7:54. DOI: 10.1007 / s13205-017-0672-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чжао, С., Жун, К. Б., Конг, К., Лю, Ю., Сюй, Ф., Мяо, К. Дж. И др.(2014). Новая лакказа из мицелия гриба Coprinus comatus с мощным антипролиферативным действием и ингибитором обратной транскриптазы ВИЧ-1. BioMed. Res. Инт . 2014, 417–461. DOI: 10.1155 / 2014/417461

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Steam and Rye Cocktail Bar Обзор

Steam and Rye говорит:

Steam & Rye — классический ресторан Американы, коктейль-бар и дискотека Late Night в самом сердце лондонского Сити, созданный Ником Хаусом и Келли Брук.Коктейли мирового класса, удостоенные награды, созданные лучшим в мире барным тендером Энди Милом, и отмеченные звездой Мишлен блюда, разработанные и под руководством Эндрю Маклиша. Steam & Rye — действительно заведение мирового класса. Этот декадентский поздний бар и ресторан, вдохновленный Соединенными Штатами 1940-х годов, перекликается с грандиозной жизнью эпохи Великого Гэтсби, встреченной старыми традициями Дикого Запада. Объявлен идеальным местом для еды, коктейлей, развлечений, театральных представлений и всестороннего шоу; Steam & Rye действительно вызвала фурор в городе и продолжает делать это ежедневно.

Социальные и коктейльные говорит:

Коктейльный гарнир прошел долгий путь со времен обычного и лишенного воображения ломтика апельсина, который вяло парил в отвертке Screwdriver . Мы отказались от оливок, лимона и черешни мараскино, и теперь у нас есть всевозможные тропические фрукты, пикантные закуски, сладкая посыпка … Иногда может возникнуть вопрос: «А я ем это ?! Каков правильный коктейльный этикет? »

Что ж, когда настоящее мороженое Mini Milk добавлено в ваш напиток, ответ наверняка будет утвердительным.

Этот взрыв летнего ликования исходит от Энди Мил, главного бармена китча и сумасшедшего Steam и Rye в Банке, Лондон. Это заведение, оформленное в американской тематике, которое включает в себя массивных танцующих девушек в бикини, реплику огромных часов на центральной станции и напиток, который доставляет кто-то, одетый как Индиана Джонс. Список коктейлей никогда не будет, кхм, «помпезным». Фактически, это меню, в котором царит изобилие и шутливый юмор.

Энди — парень, ответственный за помощь в составлении высоко оцененных списков коктейлей LCC , и с тех пор он обратил свое творческое чутье на изобретение причудливых и замечательных напитков, которые обладают вкусом и легкомыслием. Поскольку Steam and Rye имеет твердую американскую тематику, ему было с чем работать.

«Я хотел, чтобы напитки приносили определенное удовольствие — коктейли, которые были бы вкусными, доступными и привлекательными для Instagram». Энди сказал нам. «Меню проходит через разные американские эпохи, начиная с Золотой лихорадки и включая ретро-голливудские и более современные тенденции.”

Это означает, что мы начинаем с напитков, таких как Dead Man’s Boot — Дон Хулио Текила с добавлением перца чили, ванилью, имбирным пивом и лимоном, которые подаются в сапоге старателя со сбалансированной золотой звездой шерифа наверху — и переходим к таким удовольствиям, как кукурузные шарики . Это комбинация Mount Gay XO, лимонного, кокосового и карамельного сиропа для попкорна, и он представлен в копии классического мешка для попкорна в красно-белую полоску. Среди других творений в меню — Hoochy Mama , Monica Lewinsky и Five Dollar Shake , и вы увидите такие ингредиенты, как сгущенное молоко, сироп зефира и ромашковый чай, все они появляются среди спиртных напитков премиум-класса.

Один из самых популярных коктейлей в списке? Мартини Freedom Martini . Опять же, еще один дерзкий намек на современную американскую культуру — это название является намеком на то, когда Буш, чувствуя себя неподдерживаемым Францией во время вторжения в Ирак, изменил название French Fries на Freedom Fries. Таким образом, французский мартини превращается в Freedom Martini , только с истинным оттенком пара и ржи и сотнями и тысячами конфетти, украшающими поверхность.

И теперь новые летние предложения не собираются уклоняться от веселья оригинального меню.

«Я хотел вызвать лето свежими ароматами и множеством цитрусовых, ягод и мяты. Но я также хотел вызвать чувство ностальгии по детским праздникам. Вот почему мы пошли по пути добавления мороженого в каждый напиток. Это немного весело «.

Это, безусловно, весело — когда приходит ваш напиток, вы почти ожидаете услышать издалека звенящие колокольчики фургона мистера Уиппи, а среди таких любимых угощений, как Percy Pig и Mini Milk, торчащие из коллекции сумасшедших очков.

Мы пробуем два новых предложения. Первое — это Dingle Von Winkle , который подается в красной урне, в которой мороженое «Винтболл» перевернуто во льду.

Один глоток, и вы поймете, почему эти напитки вызывают летнее время — всплеск фруктового аромата вернет вас во времена липких пальцев и сладких лакомств. DVW использует водку Kettle One, клубничное пюре, сок лайма, ваниль и немного портвейна. Этот последний ингредиент фантастически работает, придавая напитку некоторую глубину и структуру, в результате чего дайкири с водкой вместо рома стал намного более оригинальным.

Мы также пробуем Honey Bunny Do Da — еще один безумный напиток, который подают в ухмыляющемся стакане тики, на котором торчит розовая леденец на палочке Funny Feet. ЦЕЛЫЙ ЗАБАВНЫЙ НОГ! Сам напиток — это освежающий сюрприз — мед, просекко, свежая мята и лайм, наложенные на джин Tanqueray No. 10. Кислотность лайма придает приятный уравновешенный привкус мягкому меду, а шипучая смесь создает приятную добавку, напоминающую шерберт.

Всегда существует опасность, что, когда напитки будут поданы так чудесно, их вкус пострадает.Но Энди Мил, очевидно, парень, который знает, как приготовить чертовски крутой коктейль, и в результате получается список, в котором есть как вкусный пунш, так и эстетическая радость. Если вы ищете что-то нестандартное, захватывающее и непохожее на все, что вы пробовали раньше, мы настоятельно рекомендуем вам отправиться в Steam and Rye, чтобы повеселиться в Новом Свете и немного повеселиться.

Ребекка Милфорд

Изучение грязных коктейлей: Smashes, Juleps и Mojitos

Коктейли, которые мы сегодня обсуждаем, объединены одной общей темой: они требуют, чтобы вы раздавливали вещи — травы, а иногда и фрукты, уступают силе нашего путаницы.Хотя мохито могут быть самыми популярными напитками для смешанных напитков, нельзя забывать о джулепах и кушанах. Кстати, вы захотите сделать небольшие инвестиции в путаницу, которую можно приобрести менее чем за 15 долларов. Они бывают из самых разных материалов, таких как дерево, пластик и нержавеющая сталь, но имейте в виду, что если вы выберете деревянный, некоторые фрукты будут окрашиваться.

Вы также хотите быть нежными, смешивая травы; идея состоит в том, чтобы высвободить их аромат и масла, а не превратить их в пасту.Еще одна вещь, которую следует учитывать, — это купить пакет Льюиса и молоток для измельчения льда. Они очень кстати и являются прекрасными терапевтическими инструментами, снимающими напряжение долгого дня.

Грязные напитки

Mojito
Мы собираемся начать с короля смешных напитков наших дней — Mojito. Mojito существует с конца 1930-х годов, но по-настоящему набрал обороты в США в начале августа этого века, когда свежевыжатые соки снова вошли в моду в составе коктейлей.

Рецепт мохито
— 6-8 листьев мяты (оставьте одну веточку мяты для украшения)
— 1 чайная ложка сверхтонкого сахара или ½ унции простого сиропа
— 1 унция сока лайма (за исключением использованной скорлупы лайма)
— 2 унции белого рома попробуйте Caña Brava Rum Blanca)
— Клубная газировка

Вставьте его в стакан, который вы будете использовать, который может быть двойным стеклом Old Fashioned или стаканом Коллинза. На дно стакана растолочь листья мяты, сахар и сок лайма. Добавьте в стакан белый ром, треснувший или колотый лед и ракушку извести.Сверху полейте содовой. Осторожно перемешайте. Украсить веточкой мяты. Подавать с соломой или палочкой для перемешивания.

Мохито / Фото: Крис Попл

Caipirinha
Следующим непонятным коктейлем, который мы решим, будет Caipirinha. Сделанный из кашаса [ка-ша-са], свежего спирта сахарного тростника, производимого в Бразилии, вы можете увидеть сходство как с мохито, так и с дайкири. Олимпийские игры в Рио снова привлекли внимание к этому напитку, поэтому ожидайте увидеть его снова в барах и латинских ресторанах.

Рецепт кайпириньи
— Половина лайма, разрезанная на четвертинки
— 1 чайная ложка сверхтонкого сахара или ½ унции простого сиропа
— 2 унции необработанной кашасы (попробуйте Avuá Prata Cachaça)

В стакане Old Fashioned, месилом и сахаром. Добавьте cachaça. Сверху выложите колотый или треснувший лед. Осторожно перемешайте. Служить.

Caipirinha / Фото: Wine Dharma

Джулепс

Джулеп — это коктейль, состоящий из спирта, мяты и сахара. Самый известный джулеп, Mint Julep — коктейль из бурбона, который действительно привлекает внимание прессы только во время Кентукки Дерби, но Джулеп также можно приготовить с бренди, ромом или другими видами виски.Это освежающие напитки, заслуживающие внимания в теплое время года.

Рецепт мятного джулепа
— 8-10 листьев мяты
— 1 чайная ложка сверхтонкого сахара или ½ унции простого сиропа
— 2 ½ унции бурбона (мы предпочитаем крепкий бурбон, например Baker’s Bourbon)
— Колотый лед

Поместите листья мяты на дно стакана (либо серебряный стакан мятного джулепа, либо двойной стакан Old Fashioned). Добавьте сахар и аккуратно перемешайте. В стакан добавить бурбон и колотый лед. Осторожно перемешайте, чтобы стекло остыло.Добавьте еще льда в насыпь сверху. Добавьте пару веточек мяты для украшения. Подавать с короткой соломкой или соломкой для джулепа.

Mint Julep / Фото: Джереми Т. Хетцель

Рецепт джулепа с бренди
То же, что и выше, но вместо бурбона можно использовать бренди, например коньяк Pierre Ferrand Original Formula 1840.

Разбивает

В коктейле Smash используется спирт + сахар + травы (обычно мята) + лед с возможностью добавления измельченных фруктов или в качестве гарнира. Вы также можете добавить немного сельтерской воды или воды, а иногда даже игристого вина.Смэш — прекрасный способ добавить в коктейли сезонные фрукты. У нас есть для вас пара потрясающих рецептов, но ниже есть еще несколько советов, которые можно попробовать. Не стесняйтесь заменять свой подсластитель там, где это необходимо, например, медом или сиропом агавы.

— Персики + бурбон + мята
— Клубника + джин + тимьян
— Вишня + рожь + эстрагон
— Малина + ром + базилик
— Ананас + текила + шалфей
— Нектарины + виски + лимонная вербена

Blackberry Mezcal Smash
— 2-3 больших ежевики
— Несколько листиков шалфея
— 1 чайная ложка сверхтонкого сахара или ½ унции простого сиропа
— 2 унции мескаля из кофе (попробуйте Montelobos Mezcal Joven)

Добавьте ежевику, шалфей и сахар на дно стакана для смешивания и аккуратно перемешайте.Добавьте мескаль. Наполовину наполните сервировочный стакан колотым или треснувшим льдом и перекатывайте взад и вперед содержимое стакана для смешивания. Полностью перелейте в сервировочный стакан и при необходимости добавьте еще льда. Украсить несколькими листиками шалфея и подавать.

Blackberry Smash / Фото: niXerKG

Whisky Smash
— ½ лимона, разрезанного на четвертинки
— 6-8 листьев мяты + 1 веточка мяты (зарезервировано для украшения)
— 1 чайная ложка сверхтонкого сахара или ½ унции простого сиропа
— 2 унции виски (попробуйте Powers Signature Release)

Положите на дно стакана для смешивания лимон, листья мяты и сахар и осторожно перемешайте.Добавьте виски. Поместите колотый лед в сервировочный стакан (двойной стакан Old Fashioned), наполненный наполовину. Вылейте содержимое стакана для смешивания в сервировочный стакан и несколько раз «перекатайте» коктейль. Добавьте еще колотого льда в сервировочный стакан и осторожно перемешайте. Добавьте веточку мяты в качестве украшения.

Whiskey Smash / Фото: Кевин О’Мара

Вы можете использовать лимоны или лаймы с другими фруктами или вместо них, но обязательно смешайте их, а не просто используйте их сок.Я предпочитаю использовать метод скручивания, чтобы смешать мои смешанные напитки, то есть добавить лед в стакан для смешивания вместе со всеми другими ингредиентами и «раскатать» его в стакан, в котором вы собираетесь подавать напиток. Вы делаете это несколько раз перемешать напиток. Это удерживает кусочки фруктов и льда в стакане. Вместо этого вы можете встряхнуть и процедить коктейль, чтобы в него не попадала большая часть фруктов и трав. Тогда можно просто украсить фруктами. Твой выбор.

В смешанных напитках главное — мягко впустить в напиток эссенцию трав.Ароматизаторы сочетаются со спиртом и сахаром, создавая освежающий и насыщенный напиток. Наслаждайтесь смешиванием и сопоставлением… и, прежде всего, РАЗБИРАЕМ!

Ищете еще спиртного к своим грязным напиткам?

С Distiller вы всегда будете знать, что находится в бутылке, прежде чем потратите ни цента. Оценивайте, просматривайте и открывайте для себя духов! Зайдите в Distiller или скачайте приложение для iOS и Android уже сегодня!

Эксклюзивные новости и исследования винного, спиртосодержащего и пивного бизнеса

Смесители премиум-класса готовы к выходу в виде коктейлей на дому Тенденция набирает обороты

Около трех лет назад Джордан Силберт, основатель и генеральный директор Q Mixers, вложил значительные средства в создание команды для работы на локальном рынке США.S. Группа добилась значительных успехов в распространении продукции на национальном уровне. В прошлом году компания сделала аналогичные инвестиции в расширение своего присутствия за пределами офиса.

«В этом году мы ожидали, что оба будут двигателями роста компании», — говорит Силберт. «И первые три месяца года так и были. Затем, в марте, внезапно, в марте бизнес в барах и ресторанах практически пошел на ноль, а розничный бизнес резко вырос ». Силберт говорит, что Q Mixers более чем вдвое увеличили продажи за пределами офиса, поскольку люди стремились приготовить коктейли ресторанного качества дома.Несмотря на это, по его словам, последние три месяца производство шло медленно, но все больше и больше потребителей признают преимущества миксеров премиум-класса как основы для своих любимых коктейлей.

Fever-Tree, ключевой конкурент с глобальной выручкой около 328 миллионов долларов, также столкнулся с резким увеличением спроса в начале этого года. «Это был абсолютно безумный период, — говорит Чарльз Гибб, генеральный директор Fever-Tree в Северной Америке. «Мы наблюдаем небывалый рост домашнего потребления, необычайный рост продаж через магазины спиртных напитков, через продуктовый канал и в нашем онлайн-бизнесе, особенно с Amazon и такими, как Drizly, Reserve Bar и другими.Думаю, все сводится к тому, что люди ищут это доступное повседневное угощение дома. Они повышают свое настроение. И они понимают, что если вы преувеличиваете свой спирт и не преувеличиваете свой миксер, из вас не получится отличный напиток ».

Fever-Tree и Q Mixers — два из нескольких брендов, соперничающих за внимание потребителей по ценам, значительно превышающим цены брендов, которые годами доминировали на рынке безалкогольных миксеров. Пандемия Covid-19 и заказы на домоседы, изданные большинством штатов, создали возможность для многих брендов наладить связь с потребителями.

«Мы наверняка видели много пробных версий нашего продукта. У него появилось много новых поклонников и клиентская база просто потому, что люди не могли найти другие бренды », — говорит Кей Си Коммосс, старший вице-президент по развитию бизнеса Powell & Mahoney Craft Cocktail Mixers. «Кроме того, мы видели, как наши постоянные клиенты накапливают запасы — наши цифры стремительно выросли». Как и многие другие бренды, Powell & Mahoney извлекла выгоду из огромного увеличения количества покупок в Интернете. В первом полугодии общий объем онлайн-продаж превысил годовые онлайн-продажи в 2019 году.

Полная информация о категории смесителей премиум-класса опубликована в выпуске Impact от 15 июля. Нажмите здесь, чтобы подписаться. — Кэрол Уорд

Получите свой первый взгляд на данные за 2019 год и прогнозы на 2020 год для винодельческой отрасли. Закажите отчеты из банка данных воздействия за 2020 год. Кликните сюда.

Рецепт коктейля из креветок | Food Network Кухня

Убрать выделение со всего

Судный бульон:

10 стаканов холодной воды

2 средние моркови, разрезанные на четвертинки

2 стебля сельдерея, разрезанных на четвертинки

1 крупная луковица, разрезанная на четвертинки

1 головка чеснока, разрезанная пополам

1 лимон, разрезанный пополам

1/2 пучка петрушки

5 веточек свежего тимьяна

2 лавровых листа

Креветка:

450 г средних или крупных креветок в панцире, промытых

1 столовая ложка кошерной соли

Коктейльный соус, рецепт см.

Дольки лимона

Коктейльный соус:

1 чашка кетчупа

1 лимон, цедра мелко натертая и отжатая

4 чайные ложки приготовленного хрена или по вкусу, осушенного

1/4 чайной ложки вустерширского соуса

Острый соус по вкусу

7 согревающих зимних коктейлей, которые можно смешать: горячее тодди, ромовый пунш и многое другое

Нет ничего плохого в том, чтобы смешать немного виски, лимона, гвоздики, меда и корицы — также известного как горячий пунш.Но горячие зимние коктейли не ограничиваются одним только пюре. На протяжении нескольких поколений мужчины и женщины во всем мире готовили возлияния для холодных месяцев из водки, рома, джина и почти любого другого ликера или ликера. Если холодной зимней ночью вам захочется выпить теплый укрепляющий коктейль, но вы хотите выпить немного более приключенческий, есть множество отличных вариантов. Это так же сложно, как выбрать свой любимый дух (или найти новый) и действовать оттуда.

Чтобы выйти на другую территорию и предложить вам горячие алкогольные напитки, чтобы пережить зиму, мы поговорили с командой барменов Нью-Йорка и попросили их поделиться своими рецептами самых горячих горячих коктейлей. От вариаций классического горячего пунша и лучшего горячего шоколада, который вы когда-либо пробовали, до необычного глинтвейна и пунша с ромом, который действительно впечатляет, вот семь согревающих холодных коктейлей, которые стоит попробовать.

Создано Амиром Бабайоффом для Офелии, Нью-Йорк

Помните, когда ваша мать говорила вам никогда не играть с огнем? Что ж, вам придется проигнорировать этот совет, чтобы сделать следующий уровень горячим тодди.Амир Бабайофф, главный бармен Офелии в Нью-Йорке, начинает с богатого многослойного бурбона Barrell Craft Spirits и добавляет нотку французского крепленого вина для дополнительной сложности. Затем добавляют немного Pineau des Charentes, чтобы подчеркнуть более мягкую часть напитка благодаря нотам персиков, чернослива, сливы и поджаренных орехов. Далее идут апельсиновый и имбирный чай без кофеина. Он добавляет Panella (неочищенный сахарный тростник) со смесью пяти зимних специй (корица, гвоздика, душистый перец, мускатный орех, кардамон), чтобы завершить сладкую сложность.Легко ли приготовить коктейль? Точно нет. Но конечный результат стоит затраченных усилий. Состав две медные кружки с горячей водой. Слейте воду из одной и добавьте 5 унций горячей воды, чайные пакетики, сироп, лимонный сок и настойки. Добавьте бурбон и бренди в кружку №2 и промойте.Зажгите кружку №2 на огне и перелейте из кружки в кружку. Перелейте в рюмку и украсьте палочкой корицы, апельсиновой цедрой и звездчатым анисом.

2. Мексиканский горячий шоколад с шипами

Создано Энтони Хениркесом для Lumaca, NYC

Горячий шоколад Boozy — непревзойденный зимний напиток. Эта версия более легкая и острая. «Традиционный итальянский горячий шоколад — это обычно богатое и приятное угощение, которое идеально подходит для холодного дня», — говорит Энтони Энрикес, директор по напиткам Lumaca в Нью-Йорке.«Но это может быть не самое лучшее до или после еды». Эта версия удаляет более тяжелые ингредиенты и душистый перец. Оставшиеся ароматы корицы и чили хорошо сочетаются с карамельными нотами текилы (они используют Chamucos). Добавьте немного свежеобжаренного зефира, и этого достаточно, чтобы вы на несколько минут забыли о холоде.

Ингредиенты:
3 чашки горячего молока
3 столовые ложки какао-порошка
3 столовые ложки сахарного песка
1/4 столовой ложки корицы
Щепотка кайенского перца
Текила Chamucos 3 унции

Направления: Смешайте все ингредиенты в стакане, украсить двумя жареными маршмеллоу.

Создано Шигефуми Кабашима, владельцем NR, Манхэттен, Нью-Йорк.

Теперь этот напиток не для новичков. Но для тех, кто привык использовать флейм или миксологов-любителей, готовых повысить свою квалификацию, Nightcap стоит затраченных усилий. Может быть, имейте под рукой огнетушитель. «Создавая этот коктейль, мы знали, что хотим добавить абсент, но хотели поэкспериментировать с шартрезом, поскольку он обладает высокой степенью крепости и знал, что он добавит очень богатый цветочный аромат», — говорит владелец бара NR Сигефуми Кабашима.«Мы нагреваем железный стержень над огнем, чтобы смешать коктейль, чтобы отрезать край зеленовато-желтого цвета и сжечь часть спирта». В напитке также есть масло, которое карамелизируется и придает коктейлю насыщенный вкус.

Состав:
1,5 унции. Зеленая чартруза
0,5 унции. Лимонный сок
0,25 унции. свежий имбирь
0,25 унции. мед
,5 унции. вода
ч. л. сливочного масла
5 штрихов Absente Absinthe

Указания: Смешайте все ингредиенты, кроме сливочного масла, в небольшом термостойком сосуде и осторожно нагрейте железный стержень на огне в течение приблизительно одной минуты.Как только утюг нагреется, осторожно перемешайте ингредиенты коктейля в термостойкой посуде. Вынуть палочку и перелить в термостойкий коктейльный бокал и добавить чайную ложку сливочного масла.

4. Глинтвейн

Создано Маршаллом Минайей, директором по напиткам Valerie, Нью-Йорк

Глинтвейн — классический зимний согреватель. В него добавляют немного бренди для дополнительного удовольствия. «Я считаю, что глинтвейн, который мы производим в Valerie, просто соответствует сезону», — говорит Маршалл Минайя, директор по напиткам Valerie в Нью-Йорке.«Мы хотим подать вам немного свежего имбиря, яблочного бренди и поддерживать постоянную температуру, чтобы согреться».

Ингредиенты:
1 бутылка (750 мл) Каберне-Совиньон
½ стакана яблочного бренди Чепмена
1 апельсин (нарезанный)
6 целых гвоздик
3 палочки корицы
3 звездочки аниса
3 целого душистого перца
¼ стакана медового сиропа
¼ чашка имбирного сиропа

Приготовление: В средней кастрюле для соуса доведите все ингредиенты до кипения (но не до кипения).Убавить огонь и оставить на 10 мин. Остудить и хранить в Камбро. Налейте в кружку 5 унций из термоса. Украсить долькой лимона и тертой корицей

5. Горячий пунш с инжиром и ромом

Создано Райаном Гэвином, менеджером бара, Gran Tivoli & Peppi’s Cellar

Этот пунш из горячего инжирного рома, созданный Райаном Гэвином, Бар В заведении Gran Tivoli & Peppi’s Cellar царит атмосфера олдскульной зимы, которая дополняет сезон. Это было сделано намеренно. «Я хотел продемонстрировать универсальность тропических ароматов в том, как они хорошо сочетаются с более традиционными сезонными ингредиентами, такими как имбирь и инжир», — сказал Гэвин.Хотя он говорит, что пунш теплый и зимний, он говорит, что фруктовые ноты рома и ананаса «вызывают праздник экзотической природы». Черт возьми, они это делают.

Состав:
,3 унции. Инжир Вин Котто
0,5 унции. Ананасовый сироп
,3 унции. Раствор молочной кислоты (10%)
1,5 унции. Санта-Тереза ​​Ром
4 унции. Горячая вода
1 унция. Чайный пакетик с имбирем и куркумой
Тепло на паровой трубке

Указания: Сборка и сервировка в емкости на 6 унций стекло. Украсить четвертью инжира на шпажке

6.Кофе и сливки

Создано Райаном Гэвином для Gran Tivoli и Peppi’s Cellar

Кофе с добавлением шипов отлично подходит для холодных месяцев. Gavin’s Coffee & Cream — восхитительный по-декадентски вариации с короной из охлажденного сладкого ванильного крема, которая плавает поверх напитка. «Мы стремились к созданию своего рода изысканного ирландского кофейного напитка, который бы демонстрировал не только восхитительный эспрессо, но и некоторые ореховые и богатые нотки бренди и вина Санто», — говорит Гэвин.«Добавив ликер Mr. Black Coffee Liqueur, мы смогли усилить вкус натурального кофе и довести сладость до той волшебной точки, которая является привкусом губ, но не слишком сладкой».

Состав:
0,75 унции бренди
0,75 унции ликера Mr. : Сложите и уложите все ингредиенты слоем в 6 унций на ножках. стекло. Украсить какао и пчелиной пыльцой.

7. The Rum Hot Toddy

Создано Кеннетом МакКоем, доступно в The Rum House, NYC

Простой и сладкий, этот вариант Toddy добавлен к рому со звездными пряностями для дополнительного тепла. «Мы делаем наш Hot Toddy из рома Santa Teresa 1796, — говорит Кеннет Маккой, главный креативный директор Rum House. «Он насыщенный, гладкий и с оттенками согревающих специй, с добавлением меда, свежего имбиря и корицы, он идеально подходит для зимнего согрева в холодный вечер.”

Ингредиенты:
2 унции пряного рома El Dorado
0,25 унции свежего лимонного сока
0,5 унции сиропа Демерара
Горячая вода из чайника
1 цедра апельсина
1 цедра лимона
Ломтик свежего имбиря
3- 4 перчатки
Палочка корицы

Указания: Наполните свой стакан Toddy горячей водой из чайника и накройте его тарелкой, чтобы согреться во время приготовления напитка. Поместите цедру лимона, цедру апельсина, гвоздику, свежий имбирь и демерару в стакан для смешивания, используя мадлер, чтобы слегка выжать сок из цедры и имбиря.Добавьте ром и лимонный сок, перемешайте барной ложкой. Слейте воду из стакана Тодди и дважды процедите коктейль, чтобы удалить мякоть. Добавьте 3-4 унции горячей воды поверх жидкости и украсьте палочкой корицы.

Ой! Пожалуйста, попробуйте еще раз.

Спасибо за подписку!