Если в iqos вставить обычную сигарету: Что будет с человеком, если через устройство IQOS покурить обычную сигарету? | ТАБАЧНАЯ КУЛЬТУРА

Вернуться в Healio

Употребление нагретых табачных изделий связано с астмой, аллергическим ринитом и атопическим дерматитом у корейских подростков

Данные и участники исследования

В настоящем исследовании использовались данные Корейского исследования рискованного поведения молодежи в возрасте 12–18 лет от среднего возраста. и средние школы в Корее, проведенные в 2018 году.Это утвержденное правительством обследование ³⁹ проводится ежегодно с 2005 года. Оно используется Корейскими центрами по контролю и профилактике заболеваний для мониторинга поведения подростков в отношении здоровья, включая потребление алкоголя, курение, ожирение и физическую активность. Обследование было разработано для создания национальной репрезентативной выборки корейских подростков со стратифицированным многоэтапным кластерным дизайном.

Первоначально 400 средних школ и 400 средних школ были отобраны случайным образом из 117 слоев, сформированных на основе административного деления и типов школ.Затем в каждой выбранной школе случайным образом выбирали по одному классу в каждом классе. Из общего числа 2 850 118 учеников репрезентативная выборка 62 823 была выбрана из 5625 школ (средних и высших) в Корее. Среди набранных репрезентативных выборок из 62 823 студентов 60 040 студентов согласились принять участие в опросе, что дает высокий процент ответов — 95,6%. Кроме того, из исследования исключались все студенты, не предоставившие информацию о своем росте или весе. Таким образом, участниками итогового исследования стали 58336 студентов (рис.1).

Схематическое изображение процесса отбора участников.

Студенты заполнили онлайн-формы информированного согласия перед тем, как принять участие в опросе в компьютерных классах. Родительское согласие было отказано, так как опрос проводился Министерством образования в школах с большим количеством учеников. Институциональный наблюдательный совет Католического университета Кореи одобрил это исследование (исключенное из обзора, MC19ZESI0073).

Меры

По результатам исследования аллергические заболевания (астма, АР или БА) были идентифицированы на основании диагнозов, поставленных участниками самостоятельно.Участникам был задан следующий вопрос: «Ставил ли врач вам диагноз астмы / аллергического ринита / атопического дерматита в течение последних 12 месяцев?» (Да, нет).

В этом исследовании рассматривались три табачных изделия, а именно обычные сигареты, электронные сигареты и ПВТ. Студенты определяли, что привыкли к сигаретам, если они ответили «да» на вопрос «Выкуривали ли вы когда-нибудь сигарету в своей жизни, хотя бы одну затяжку?». Чтобы определить историю использования электронных сигарет или ПВТ, мы спросили учащихся, пользовались ли они когда-либо электронной сигаретой или нагретым табачным изделием (например.g., IQOS, glo или lil), за исключением обычных сигарет и электронных сигарет в их жизни. Когда-либо употребление двух или трех табачных изделий определялось как двойное или тройное употребление. Пассивное курение дома оценивалось с помощью следующего вопроса: «Сколько дней в течение последних семи дней вы проводили время с кем-то, кто курил в вашем доме (член семьи или гость)?» Между тем, по данным на вопрос: «Были ли вы когда-нибудь в тесном контакте с активным курильщиком в школе за последние семь дней?» Пассивное курение дома и в школе было разделено на три группы: 0 день / неделя; 1–4 дня в неделю; и ≥5 дней в неделю.

Общие характеристики, такие как возраст, пол, ожирение, место проживания, экономическое положение семьи и физическая активность, также оценивались и использовались в качестве ковариат в моделях логистической регрессии. По индексу массы тела (кг / м ² ) участники исследования были разделены на четыре группы в соответствии с рекомендациями Центров по контролю и профилактике заболеваний для детей и подростков ⁴⁰ . Четыре группы включали ожирение (≥95 ^-й -й процентиль), избыточный вес (≥85 ^-й -й процентиль и <95 ^-й -й процентиль), нормальный или здоровый вес (≥5 ^-й процентиль и <85 ^-й процентиль), и недостаточный вес (<5 ^-го процентиля).Переменная «жилой район» имеет три значения, включая большие города, средние или малые города и провинции. Студентов спросили: «Каково экономическое положение вашей семьи?» в анкете. В анкете было указано пять уровней экономического статуса семьи: высокий, средне-высокий, средний, средне-низкий и низкий, и для анализа они были перегруппированы как высокий, средний и низкий. Физическая активность оценивалась как количество дней в неделю с более чем 60 минутами занятий умеренной интенсивностью, которые вызывали небольшое учащение дыхания или частоту пульса.Студентов спросили: «В течение последних семи дней, сколько дней вы выполняли более 60 минут физической активности средней интенсивности в день?». Ответы относительно частоты физической активности варьировались от отсутствия до семи дней в неделю. Физически активными считались участники, занимающиеся деятельностью средней интенсивности не менее пяти дней в неделю. Критерии физической активности основывались на рекомендациях по физической активности умеренного уровня, изложенных в Международном вопроснике по физической активности.

Статистический анализ

Во-первых, описательная статистика общих характеристик участников была представлена ​​в виде невзвешенных частот и взвешенных процентов. Кроме того, были использованы тесты хи-квадрат для изучения разницы в распространенности каждого аллергического заболевания по общим характеристикам, характеристикам, связанным с курением, и типу употребления табака. Впоследствии был проведен простой логистический регрессионный анализ для расчета отношения шансов (OR) и скорректированного OR (AOR) для астмы, AR и AD за последние 12 месяцев на основе употребления табачных изделий; Также были рассчитаны 95% доверительные интервалы (ДИ).Наконец, был проведен полиномиальный логистический регрессионный анализ для выявления ассоциаций употребления табачных изделий с риском аллергических заболеваний. Бонферрони для апостериорного анализа использовался для множественных сравнений. Скорректированные модели включали возраст, пол, ожирение, жилой район, экономический статус семьи и физическую активность в качестве ковариант. В этом исследовании были отражены сложные модули выборки и применены рекомендованные веса. Все статистические анализы были выполнены с использованием SPSS версии 26.0 (IBM, Армонк, Нью-Йорк, США).Уровень статистической значимости был установлен на уровне p <0,05.

Табак, не сжигаемый нагреванием (IQOS), фибробласты и кератиноциты полости рта: цитотоксичность, морфологический анализ, апоптоз и клеточный цикл. Исследование in vitro — Pagano — 2021 — Журнал исследований пародонта

1 ВВЕДЕНИЕ

Табакокурение — одна из самых серьезных проблем общественного здравоохранения, с которыми когда-либо сталкивался мир. Несмотря на более чем 8 миллионов смертей в год, которые можно напрямую отнести к этому, их все еще составляет около 1.3 миллиарда курильщиков по всему миру. ¹ Курение является основной причиной смертности от сердечно-сосудистых заболеваний, таких как атеросклероз и его последствия, ² респираторные заболевания, такие как хроническая обструктивная бронхопатия (ХОБЛ), ^{3, 4} хронический бронхит и эмфизема легких, ⁵ заболевания костей такие как остеопороз ^{6, 7} , а также рак, особенно рак легких, мочевого пузыря, печени, молочной железы и злокачественные новообразования полости рта. ^{8, 9} Следовательно, правительства во всем мире продвигают кампании и законы по борьбе с курением.Многие устройства были разработаны для того, чтобы побудить к отказу от курения, например, никотиновые пластыри и жевательные резинки, которые, поскольку они не воспроизводили ритуал курения, часто не имели своей цели. ¹⁰ Несмотря на это, электронные сигареты и сигареты IQOS по-прежнему широко распространены. Предполагается, что в качестве альтернативы курению табака эти устройства менее вредны, но их реальные последствия до сих пор неизвестны.

Нагретый табачный продукт (HTP) IQOS с батарейным питанием, который производится Philip Morris International, был запущен в 2014 году и одобрен Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA) для рынка США в апреле 2019 года.Сегодня он представлен на 51 рынке в Европе, Южной Америке и Азии. ¹¹ Подобно традиционной сигарете, устройство IQOS с батарейным питанием содержит табачный картридж длиной около 3 см с фильтром или без него. Картридж вставляется в самонагревающийся цилиндр портативного аккумулятора, который благодаря алюминиевой фольге нагревает его до температуры около 350 ℃. ¹² В комплект входит также зарядное устройство.

• Табак, обработанный глицерином, с 0.5 мг никотина
• Внешняя бумага, покрывающая тонкую алюминиевую фольгу вокруг табака
• Охлаждающий фильтр из биополимера
• Полый мундштук из ацетатной целлюлозы вокруг фильтра.

Основное преимущество устройства IQOS заключается в том, что он не сжигает табак, который нагревается до гораздо более низкой температуры, чем в традиционных сигаретах.Фактически, поскольку большая часть из 0,3–0,8 мг никотина и 0,0005 мг смолы горит в обычной сигарете, около 20% всасывается в организм. ^{13, 14} По словам производителей, отсутствие продуктов сгорания и токсичного дыма в устройстве IQOS устраняет или снижает большинство вредных веществ, связанных с табаком, и риски для здоровья. ¹⁵ Напротив, в нескольких исследованиях было обнаружено, что аэрозоль IQOS содержал вещества, полученные в результате пиролиза, и что термогенное разложение табачного картриджа было похоже на традиционный сигаретный дым. ¹⁵ В аэрозоле IQOS были обнаружены токсичные компоненты сигаретного дыма, такие как смола, никотин, карбонильные соединения (формальдегид, акролеин, ацетальдегид) и нитрозамины, что потенциально представляет опасность для здоровья человека. ¹⁶ Действительно, один анализ показал, что выбросы IQOS содержат органические кислоты, никотин и альдегиды, такие как ацетальдегид, формальдегид и акролеин, хотя и в более низких концентрациях, чем в традиционных сигаретах. ¹⁷ Некоторые исследования даже показали, что IQOS со вкусом ментола содержит еще более высокие концентрации этих вредных компонентов. ¹⁸

На сегодняшний день очень немногие научные исследования токсичности IQOS в основном сосредоточены на самом устройстве IQOS и на сравнении его аэрозольного состава с традиционными и электронными сигаретами. ¹⁹ Несколько разногласий возникли по поводу количества вредных веществ, выделяемых IQOS, следует ли классифицировать его выбросы как аэрозоль или дым и, если дым, то последствия пассивного курения. ^{20, 21} Исследования in vitro показали, что токсичность аэрозоля IQOS занимает промежуточное положение между электронными и традиционными сигаретами.Кроме того, он повредил клетки дыхательных путей, единственные клетки, которые были исследованы на сегодняшний день. ^{22, 23}

Поскольку полость рта является первой анатомической структурой, которая вступает в контакт с сигаретным дымом и аэрозолем IQOS, казалось, что требуется анализ их воздействия на определенные популяции клеток полости рта. В настоящем исследовании in vitro оценивалось биологическое воздействие курения сигарет IQOS на фибробласты и кератиноциты полости рта. В частности, жизнеспособность определяли анализом МТТ, морфологию — анализом SEM, а миграцию — анализом царапающей раны.Апоптоз и клеточный цикл анализировали с помощью проточной цитометрии. Уровни экспрессии генов p53, Bcl2, p16 и p21 оценивали с помощью ОТ-ПЦР.

Первая нулевая гипотеза состоит в том, что биологические эффекты, вызываемые устройствами IQOS, аналогичны тем, которые вызывают традиционные сигареты.

Вторая нулевая гипотеза состоит в том, что результаты этого исследования in vitro не позволяют выдвигать предположения о повреждениях, вызванных устройством IQOS.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Дизайн исследования

Целью данного исследования является сравнение воздействия аэрозоля IQOS на и необлученных фибробластов десен человека и кератиноцитов человека.

2.2 Контрольный материал

Наборы IQOS для защиты от нагревания ( ^© Phillip Morris Products S.A., Швейцария) и картонные коробки с желтыми тепловыми стержнями IQOS Marlboro (HEETS) ( ^© Phillip Morris Brands Srl, Италия) были приобретены в Перудже, Италия.Основные характеристики описаны в таблице 1.

2.3 Клеточная культура

BSCL138 фибробластов десен человека (IZSLER, Брешиа, Италия) выращивали в виде однослойных культур в стерильных полистирольных колбах Т-75 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), содержащих минимальную необходимую среду Игла (MEM, Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). ) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS, Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), пенициллина (10000 Ед / мл), стрептомицина (10000 мкг / мл) и 25 мкг / мл амфотерицина B в качестве противогрибкового агента. (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США).

BSCL 143 кератиноцитов человека (IZSLER, Брешиа, Италия) выращивали в виде однослойных культур в стерильных полистирольных колбах Т-75 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), содержащих среду Игла, модифицированную Дульбекко (DMEM, Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). ) с добавлением 7% фетальной телячьей сыворотки (FBS, Thermo Fisher Scientific).

Фибробласты и кератиноциты поддерживали в увлажненном инкубаторе при 37 ° C с 5% CO ₂ при смене среды дважды в неделю и контролировали под фазово-контрастным инвертированным микроскопом Leitz.После 80% слияния (логарифмическая фаза роста) клетки отделяли смесью 0,25% трипсина и 0,02% этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA). После разведения 1: 1 в трипановом синем красителе (10 мкл клеток и 10 мкл трипанового синего) клетки подсчитывали в автоматическом счетчике клеток Countess (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) и высевали, как описано ниже. Все тесты проводились между седьмой и девятой субкультурами. ²⁴

2.4 Приготовление сигаретного экстракта IQOS

IQOS был приготовлен модифицированным методом Карпа и Яноффа. ²⁵ При использовании перистальтического насоса был установлен следующий протокол затяжки: продолжительность затяжки 4 с, каждые 30 с, с объемом 55 мл на затяжку. Десять затяжек соответствовали одному сеансу курения продолжительностью 318 с. Аэрозоль IQOS от одной Yellow Heat Stick был помещен в 20 мл предварительно нагретой питательной среды (MEM и DMEM), что дало свежий 100% экстракт. Доводили pH до 7,4 и фильтровали через фильтр 0,22 мкм (Merck Millipore, Германия). Экстракт серийно разводили следующим образом: двукратное (50%), четырехкратное (25%), восьмикратное (12.5%), 16-кратное (6,25%) и 32-кратное (3,125%). Каждое разведение проводилось по объему в среде. Отрицательный контроль представлял собой клетки, обработанные свежей культуральной средой (MEM и DMEM). Разработанная система дыма не вызывает тепловых изменений питательных сред.

2.5 Анализ цитотоксичности (МТТ)

Фибробласты десен человека и кератиноциты человека высевали (10000 клеток / лунку) на оптические прозрачные 96-луночные планшеты для микротитрования с плоским дном (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA USA) и инкубировали в течение 24 часов при 37 ° C в 5% CO ₂ .Впоследствии культуральную среду удаляли и заменяли 100 мкл разбавленных (от 50% до 3,125%) или неразбавленных экстрактов. Контрольные группы обрабатывали свежей питательной средой. Культуры клеток инкубировали в течение 24 ч при 37 ° C в 5% CO ₂ .

Цитотоксичность оценивали с помощью колориметрического анализа, измеряющего активность митохондриальной дегидрогеназы.

Восстановление растворимой соли тетразолия, 3- [4,5-диметил-2-тиазолил] -2–5-дифенил-2H тетразолийбромида (MTT, Sigma Chemical Co., Сент-Луис, Миссури, США) в осадок формазана, вызывает изменение цвета с желтого на пурпурный. ²⁶ После обработки в каждую лунку добавляли 10 мкл раствора МТТ (5 мг / мл). Планшеты накрывали и инкубировали 4 ч при 37 ° C. Кристаллы формазана, производные от МТТ, растворяли добавлением диметилсульфоксида (100 мкл / лунку; ДМСО, Sigma Chemical Co., Сент-Луис, Миссури) при осторожном встряхивании в течение 30 мин. Поглощение измеряли при 570 нм с использованием автоматического считывающего устройства для микропланшетов (Bio-Rad, модель 680 XR, Калифорния).

Согласно ISO 10993-5, ²⁷ меньшее количество жизнеспособных клеток привело к снижению активности митохондриального фермента (янтарной дегидрогеназы, SDH), что напрямую коррелировало с количеством сине-фиолетового формазана, продуцируемого восстановлением соли тетразолия. Сравнивали значения абсорбции в контрольной и обработанной группах. Жизнеспособность клеток рассчитывали по следующей формуле с использованием оптической плотности (OD):% жизнеспособности клеток = (отношение OD обработанной группы / OD контрольной группы) × 100.

2.6 Морфологический анализ (SEM)

Для определения влияния экстрактов на морфологию клеток фибробласты десен человека и кератиноциты человека выращивали на покровном стекле (диаметр 12 мм × глубина 0,15 мм, Exacta Optech Lab Center SpA, Модена, Италия) в MEM с добавлением 10% FBS, антибиотики и противогрибковые средства и DMEM с добавлением 7% FBS, соответственно, в течение 24 ч при 37 ° C в 5% CO ₂ . Культуральную среду выбросили и заменили 400 мкл 6.25% разбавленные или неразбавленные экстракты. Контрольные группы обрабатывали свежей питательной средой. Культуры клеток инкубировали еще 24 ч при 37 ° C в 5% CO ₂ . Клетки трижды промывали PBS, фиксировали 2,5% глутаровым альдегидом в фосфатно-солевом буфере PBS в течение 1 ч при комнатной температуре, трижды промывали дистиллированной водой, поэтапно дегидратировали в этаноле и сушили при комнатной температуре. ²⁸ После сушки до критической точки с использованием метода фреона образцы были металлизированы разбрызгиванием хромом (8 нм) и просмотрены под полевым эмиссионным пистолетом SEM LEO 1525 (ZEISS, Йена, Германия).Напряжение ускорения составляло 5 кВ, изображения получали с помощью встроенного в объектив детектора. Увеличение было: 500 ×, 2500 ×, 5000 × и 10 000 ×.

2.7 Анализ царапин

Для исследования миграции фибробластов и кератиноцитов клетки высевали на 6-луночные планшеты для микротитрования с плоским дном (Thermo Fisher Scientific) и выращивали в 2 мл среды. При 90% -ном слиянии среду удаляли и с помощью стерильного наконечника пипетки P-200 наносили прямую царапину вдоль монослоя в центре лунки, как описано в другом месте. ²⁹ Клеточные остатки осторожно удаляли фосфатно-солевым буфером Дульбекко (PBS), а культуры подвергали воздействию неразбавленных (100%) и 6,25% разбавленных экстрактов. Изображения закрытия ран были получены через 0 ч, 17 ч, 24 ч для фибробластов десен человека и через 0 ч, 20 ч, 40 ч, 64 ч и 70 ч для кератиноцитов человека с использованием обычного фазово-контрастного микроскопа (Olympus, Токио, США). Япония). На фотографиях с увеличением 200 × представлены профили миграции и морфологии.

2,8 Выделение РНК и анализ ОТ-ПЦР

Для анализа генов апоптоза и клеточного цикла фибробласты десен человека и кератиноциты высевали (1 × 10 ⁵ клеток / мл) в 6-луночные планшеты для микротитрования с плоским дном (Thermo Fisher Scientific).При слиянии клетки обрабатывали 6,25% разбавленными и неразбавленными экстрактами или свежей средой (контрольные группы) в течение 24 часов.

Общая РНК была выделена, как описано в другом месте. ²⁹ Вкратце, РНК из контрольных и обработанных фибробластов / кератиноцитов выделяли с использованием набора для очистки общей РНК (Thermo Fisher Scientific) и количественно определяли путем считывания OD при 260 нм на BioPhotometer (Eppendorf, Milano, Italia). Используя ABM (Richmond, Canada), 1 мкг тотальной РНК подвергали обратной транскрипции (RT) в конечном объеме 20 мкл.ПЦР в реальном времени выполняли с использованием 2 мкл кДНК из реакции RT. Последовательности праймеров каждого гена перечислены в таблице 2. Праймеры были сконструированы с помощью программного обеспечения праймеров PERL с использованием эталонных последовательностей NCBI EntrezGene в качестве матрицы и синтезированы Thermo Fisher Scientific. ПЦР в реальном времени выполняли в цикле Mx3000P (Stratagene, Амстердам, Нидерланды) с использованием FAM для обнаружения и ROX в качестве эталонного красителя. Одностадийную ПЦР выполняли в 25 мл Brilliant SYBR® Green QPCR Master Mix (Stratagene, Амстердам, Нидерланды) в соответствии с инструкциями производителя.На каждой стадии отжига образование продукта контролировали с помощью флуоресцентного красителя, связывающего двухцепочечную ДНК, SYBR (r) Green. Относительный уровень экспрессии гена «домашнего хозяйства» глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH) использовали для нормализации экспрессии маркерного гена в каждом образце. Сразу после ПЦР строили кривую плавления, повышая температуру инкубации с 55 до 95 ° C, чтобы подтвердить специфичность амплификации. Результаты выражали как кратное изменение по сравнению с необработанными контрольными значениями; все значения были рассчитаны с помощью программного обеспечения MxPro QPCR (Stratagene).

2.9 Анализ апоптоза и клеточного цикла

Апоптоз и анализ клеточного цикла оценивали с помощью проточной цитометрии, как описано ранее. ²⁹ Вкратце, через 24 часа после обработки неразбавленными и 6,25% разбавленными экстрактами в течение 24 часов собирали фибробласты десен и кератиноциты человека, ресуспендировали в 0,5 мл гипотонического раствора йодида пропидия (PI) (50 мкг / мл йодида пропидия в 0,1 % цитрата натрия плюс 0,1% TritonX-100) и анализировали методом проточной цитометрии с использованием проточного цитометра Coulter Epics XL-MCL (BeckmanCoulter).Данные анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo (TreeStar).

2.10 Статистический анализ

На рисунках показано среднее значение ± SD (стандартное отклонение) трех независимых экспериментов, выполненных в пяти повторах. Односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) выполняли с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 5.01 (Prism, Калифорния, США). p значений <0,05 считались статистически значимыми.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Анализ цитотоксичности (МТТ)

При всех разведениях экстракт IQOS увеличивал жизнеспособность фибробластов десны человека в среднем на 30% (диапазон 23% для неразбавленного экстракта — 41% для разведения 6,25). При 100%, 50%, 25% и 3,12% разведениях значимость достигла p <0,05, которая упала до p <0,001 при разведениях 12,5% и 6,25% (рис. 1A).

Влияние экстрактов IQOS (разбавленных и неразбавленных) на фибробласты десен человека (A) и кератиноциты человека (B) с использованием анализа МТТ.Результаты для каждого экстракта выражаются как процент активности SDH по сравнению с контролем (100%). Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение трех независимых экспериментов, выполненных в пяти повторах для каждого образца. Отличия от контроля: * p <0,001; ** p <0,05

При всех разведениях экстракт IQOS увеличивал жизнеспособность кератиноцитов человека в среднем на 60% (диапазон 30% с неразбавленным экстрактом — 79% с разведением 6,25%) ( p <.001) (Рисунок 1B).

Повышение жизнеспособности обеих клеточных линий происходило из-за стимула пролиферации. Следовательно, в следующих экспериментах использовался только неразбавленный экстракт и разбавленный на 6,25%.

3.2 Морфологический анализ (SEM)

Помимо подтверждения пролиферации клеток (рис. 2A), анализ SEM показал, что неразбавленные и разбавленные 6,25% экстракты IQOS вызывали только гофрирование поверхности клеток в фибробластах десен (рис. 2B, C) по сравнению с контрольными клетками.Ни один из экстрактов IQOS не влиял на прочную адгезию фибробластов к субстрату. Как и в контрольных клетках, наблюдались несколько филоподий и ламеллиподий, что указывает на адгезию и миграцию (рис. 2B, C).

Влияние экстрактов IQOS на морфологию фибробластов десен человека. Сканирующая электронная микроскопия (SEM) микрофотографии необработанных фибробластов десен человека (контроль) или фибробластов, подвергшихся воздействию неразбавленных и разбавленных до 6,25% экстрактов с различным увеличением (A 500 ×, B 2500 ×, C 10000 ×) после 24 часов культивирования.Филоподии обозначены стрелками, а ламеллиподии — остриями стрелок

По сравнению с контролем, пролиферация кератиноцитов была больше с 6,25% разбавленным экстрактом, чем с неразбавленным (Рисунок 3A), и наблюдалось больше филоподий и ламеллиподий (Рисунок 3B, C), которые были длинными и тонкими после воздействия неразбавленного экстракта и короткими и густыми. после воздействия 6,25% разбавленного раствора (рис. 3D).

Влияние экстрактов IQOS на морфологию кератиноцитов человека.Сканирующая электронная микроскопия (SEM) микрофотографии необработанных кератиноцитов человека (контроль) или кератиноцитов, подвергшихся воздействию неразбавленных и разбавленных до 6,25% экстрактов с различным увеличением (A 500 ×, B 2500 ×, C 5000 ×, D 10000 ×) через 24 часа культура. Филоподии обозначены стрелками, а ламеллиподии — остриями стрелок

3.3 Тест на царапину

Оба экстракта IQOS вызывали сходное, незначительное увеличение миграции фибробластов десен по сравнению с контролем.Через 24 часа все раны закрылись (рис. 4A, B).

Влияние неразбавленных (100%) и разбавленных до 6,25% экстрактов IQOS на миграцию фибробластов десны человека в анализе миграции при заживлении ран. (A) Типичные фазово-контрастные изображения ран были получены через 0, 17 и 24 часа (увеличение 200 ×). (B) Количественная оценка процента закрытой области раны, рассчитанная путем отслеживания границы раны с использованием программного обеспечения ImageJ. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение трех независимых экспериментов

Характер миграции варьировался в зависимости от разбавления кератиноцитов.Неразбавленный экстракт стимулировал миграцию в течение 40 часов, после чего миграция замедлялась, и, как и в контроле, рана оставалась открытой через 70 часов. Разбавленный экстракт 6,25% стимулировал миграцию сильнее, и закрытие раны наблюдалось через 64 ​​часа (рис. 5A, B).

Влияние неразбавленных (100%) и разбавленных до 6,25% экстрактов IQOS на миграцию кератиноцитов человека в анализе миграции при заживлении ран. (A) Репрезентативные фазово-контрастные изображения ран были сделаны в 0 ч, 20 ч, 40 ч, 64 ч и 70 ч (200-кратное увеличение).(B) Количественная оценка процента закрытой области раны, рассчитанная путем отслеживания границы раны с использованием программного обеспечения ImageJ. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение трех независимых экспериментов. Отличия от контроля: * p <0,001; ** p <0,05

3.4 Анализ апоптоза и клеточного цикла

Проточная цитометрия не выявила существенной разницы в апоптозе фибробластов и кератиноцитов через 24 часа после воздействия неразбавленного и 6.25% разбавленные экстракты IQOS (Фигуры 6А и 7А). Оба экстракта значительно увеличили процентное содержание каждой клетки в фазах клеточного цикла S ( p <0,001 для обоих) и G2 / M ( p <0,05 для обоих) (Фигуры 6B и 7B).

Влияние экстрактов сигаретного IQOS на апоптоз (A) и клеточный цикл (B). Фибробласты десен человека обрабатывали неразбавленными и разбавленными до 6,25% экстрактами в течение 24 часов. Клетки собирали и окрашивали PI и анализировали с помощью проточной цитометрии на процентное содержание апоптозных клеток (а) и на процентное содержание клеток в различных фазах клеточного цикла (В).Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение трех независимых экспериментов, проведенных в трех экземплярах для каждого экстракта. Отличия от контроля: * p <0,001; ** p <0,05

Влияние экстрактов сигаретного IQOS на апоптоз (A) и клеточный цикл (B). Кератиноциты человека обрабатывали неразбавленными (100%) и разбавленными до 6,25% экстрактами в течение 24 часов. Клетки собирали и окрашивали PI и анализировали с помощью проточной цитометрии на процентное содержание апоптозных клеток (A) и на процентное содержание клеток в различных фазах клеточного цикла (B).Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение трех независимых экспериментов, проведенных в трех экземплярах для каждого экстракта. Отличия от контроля: * p <0,001; ** p <.05.

3.5 Апоптоз и экспрессия генов, связанных с клеточным циклом

В фибробластах десен человека неразбавленный (100%) сигаретный экстракт IQOS и 6,25% разбавленный экстракт значительно увеличивали экспрессию p53 примерно в 2 и 3,6 раза, соответственно, по сравнению с контролем ( p <.001), снизились уровни экспрессии Bcl2 примерно в два и пять раз соответственно ( p <0,001) и уровни p21 примерно в два раза в обоих случаях ( p <0,001), в то время как экспрессия p16 оставалась неизменной (фигура 8A).

Влияние неразбавленных (100%) и разведенных до 6,25% экстрактов IQOS на апоптоз и экспрессию генов, связанных с клеточным циклом ( p53 , Bcl2 , p16 и p21) оценено с помощью RT-PCR через 24 часа на человеке фибробласты десен (A) и кератиноциты человека (B).Результаты для каждого экстракта выражены как кратное изменение значений мРНК, нормализованных по GAPDH. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение трех независимых экспериментов, проведенных в трех экземплярах для каждого образца. Отличия от контроля: * p <0,001

В кератиноцитах человека неразбавленный (100%) сигаретный экстракт IQOS и 6,25% разбавленный экстракт значительно подавляли экспрессию p53 примерно в два и пять раз соответственно ( p <0,001) и повышали экспрессию Bcl2 в четыре и три раза соответственно. по сравнению с контролем ( p <.001). Экспрессия p16 и p21 не изменилась (фигура 8B).

4 ОБСУЖДЕНИЕ

В организме человека дым сначала попадает в полость рта и непосредственно контактирует со слизистой оболочкой рта. При растворении в слюне его компоненты всасываются эпителием ротовой полости, и около 100 из 5000 химических веществ потенциально токсичны. Более того, курильщики подвержены большему риску более тяжелого, не поддающегося лечению пародонтита, чем некурящие. ³⁰ Большинство исследований in vitro сообщают, что курение сигарет снижает жизнеспособность и пролиферацию популяций клеток полости рта, ^{31, 32} клеточная миграция, ^{33, 34} индуцирует морфологические модификации ^{35, 36} и продукцию медиаторов воспаления ^{37, 38} а также блокирование клеточного цикла, остановка и апоптоз. ³⁹ Все эти эффекты зависят от дозы и времени. ^{35, 40, 41} Другим важным аспектом токсичности курения сигарет является нагревание, которое может вызвать длительное раздражение слизистой оболочки полости рта, утолщение тканей и усиление ороговения с потенциальной злокачественной трансформацией тканей. ⁴² Тепло также вызывает изменения твердого неба, такие как воспаление тканей и раздражение малых слюнных желез, которые представляют воспаленные протоки и нижнюю губу, с развитием актинического хейлита или рака губ. ⁴³

Ранние исследования устройства IQOS были сосредоточены на составе аэрозоля, подчеркнув, что он содержит несколько потенциально вредных компонентов, хотя и в более низких концентрациях, чем в традиционном сигаретном дыме. Газовая хроматография-масс-спектрометрия (ГХ-МС) обнаружила 62 летучих соединения, включая карбонилы, такие как пропаналь, акролеин, 3-метилбутаналь, диацетил и 2,3-пентандион, тяжелые металлы, ароматизаторы, акролеин, диацетил и 2,3-пентандион, все они очень токсичны и представляют опасность для здоровья, особенно для здоровья полости рта. ⁴¹ Поскольку в нескольких исследованиях in vitro изучались эффекты устройства IQOS на легочные клетки ^{22, 23} или остеокласты человека, ¹² , настоящее исследование сосредоточено на кератиноцитах человека и фибробластах десен человека.

Первыми трудностями, которые нам пришлось преодолеть, было улавливание всех компонентов аэрозоля с учетом их летучести и внесение их в культуры клеток. Мы разработали механизм образования дыма, состоящий из вакуумного насоса, который всасывал аэрозоль IQOS в колбу, содержащую культуральную среду, которая абсорбировала все ее компоненты.Это было необходимо, потому что, хотя в исследованиях токсикологии сигарет использовались дымовые машины с фиксированными условиями дыма, протоколы воздействия оказались неоптимальными из-за изменения аэрозолей сигарет. ^{44, 45} Еще одна трудность заключалась в тестировании того же количества аэрозоля, что и у потребителей IQOS. В настоящем исследовании был выбран протокол воздействия, соответствующий времени курения 5 мин и 18 с, то есть времени, необходимому для выкуривания одной палочки, содержащей 5 мг никотина, с учетом того, что содержание никотина в стиках IQOS всегда постоянно, в отличие от традиционных и электронные сигареты.

Это предварительное исследование показало, что аэрозоль IQOS менее токсичен, чем традиционный сигаретный дым. Хотя аэрозоль не повреждает полость рта, он стимулирует пролиферацию клеток, о чем свидетельствуют более продолжительные и интенсивные фазы клеточного цикла S и G2 / M, большая жизнеспособность и миграция, а также большее количество адгезионных свойств в морфологии кератиноцитов. Удивительно, но экспрессия генов, связанных с апоптозом и клеточным циклом, не полностью подтверждает эти данные.

Все концентрации аэрозолей повышали жизнеспособность фибробластов человека и, в большей степени, кератиноцитов, согласно оценке в соответствии с рекомендациями ISO 10993-5, за счет митохондриальной активности, что согласуется с отчетами с использованием таких тестов, как LDH или нейтральный красный в дополнение к MTT. ^{44, 46} Сообщалось, что IQOS менее цитотоксичен, чем традиционные сигареты, в отношении эпителиальных клеток бронхов человека ²³ и не влиял на жизнеспособность первичных остеобластов человека и иммортализованных мезенхимальных стволовых клеток человека после короткого (48 часов) и длительного периода действия. срок (14 и 21 день) лечения. ¹² Посредством пролиферации, миграции, синтеза факторов роста и молекул внеклеточного матрикса повышенная пролиферация фибробластов может способствовать процессам заживления, но, с другой стороны, более высокая клеточная метаболическая активность может негативно повлиять на сигнальные пути гибели и выживания клеток. ⁴⁷ Кроме того, нарушение регуляции сукцинатдегидрогеназы, митохондриальной редуктазы и генов-супрессоров опухолей может способствовать неконтролируемой пролиферации клеток — механизму, лежащему в основе возникновения злокачественных опухолей. ⁴⁸

Воздействие экстрактов IQOS не изменяло морфофункционального статуса фибробластов, но увеличивало филоподии и ламеллиподии, расширение цитоплазмы в кератиноцитах. Ответ кератиноцитов на воздействие IQOS может быть попыткой достичь большей стабильности за счет поддержания прочного контакта с субстратом и соседними клетками. Экстракт IQOS не влиял на морфологию остеобластов человека, судя по длине первичных ресничек, присутствующих во время их дифференцировки. ¹²

Инновационные результаты настоящего исследования заключались в том, что все концентрации IQOS вызывали большую миграцию клеток, чем контроль, как показали результаты скретч-теста, которые, как и ожидалось по результатам МТТ, были более выражены в кератиноцитах, чем в фибробластах, особенно с 6,25%. Экстракт IQOS.

IQOS было связано с отсутствием апоптоза, распространенной формы гибели клеток, что согласуется с нашими выводами о моделях жизнеспособности и миграции.Действительно, в кератиноцитах человека экспрессия двух ключевых генов, связанных с апоптозом, то есть антиапоптотического Bcl2 и проапоптотического p53, была значительно повышена и подавлена ​​соответственно. Неожиданно для фибробластов наблюдалась противоположная картина с активацией p53 и подавлением Bcl2. Продолжительные активные фазы в клеточном цикле были связаны, соответственно, с экспрессией p21, которая контролирует прогрессирование G0 / G1 до S-фазы, и экспрессией p16, которая блокирует S-фазу. ⁴⁹ Экспрессия ни одного фактора не была изменена в кератиноцитах, в то время как в фибробластах она значительно подавлялась.

Эти изменения в экспрессии генов указывают на то, что механизм ответа, защитный или агрессивный, еще предстоит определить, был активирован воздействием экстрактов IQOS. Этот механизм ответа кажется полной противоположностью тому, что традиционное курение вызывает в клетках человека, поскольку оно связано с высокими показателями цитотоксичности и апоптоза. ⁵⁰ Хотя многие ключевые апоптотические белки, которые активируются или инактивируются в путях апоптоза, были идентифицированы, молекулярные механизмы, лежащие в основе активации, полностью не изучены и являются предметом текущих исследований. ⁵¹ Пытаясь согласовать эти явно противоречивые результаты, мы могли бы предположить, что концентрации альдегида, акреолина и тяжелых металлов в аэрозоле IQOS ⁴¹ могут повредить ДНК, увеличивая разрывы цепей, вызывая начальную мутагенность / генотоксичность ⁵² , что еще не было обнаружено в скорости апоптоза. Для подтверждения этой гипотезы потребуется оценка опухолевых и пролиферирующих генов. С другой стороны, посттранскрипционные модификации гена р53 могут предотвратить увеличение гибели клеток из-за апоптоза.

В заключение, клиническое значение результатов этого предварительного исследования эффектов устройства IQOS трудно различить. Наша инновационная система показала, что IQOS не токсичен для фибробластов и кератиноцитов полости рта, поскольку не влияет на выживаемость и морфологию. Поскольку это действительно повлияло на пролиферацию и клеточный цикл, необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, какие компоненты аэрозоля IQOS задействованы. Другим ограничением этого исследования было ограничение воздействия IQOS до 24 часов, что исключало возможность долгосрочных наблюдений.Таким образом, было бы интересно изучить лечение, повторяющееся с течением времени (хроническое).

Даже если система дыма, использованная в исследовании, не вызывает тепловых изменений, вызванных устройством IQOS, дальнейшее ограничение исследования заключается в необходимости оценки воздействия нагревания на слизистую оболочку полости рта. Исходя из этих предварительных результатов, наши нулевые гипотезы могут быть отвергнуты.

БЛАГОДАРНОСТИ

Авторы искренне благодарят Dr.Г.А. Бойд за английскую редакцию.

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

ВКЛАД АВТОРА

Все авторы внесли свой вклад в концепцию и дизайн исследования. Подготовку материала, сбор данных и анализ выполняли Паоло Негри, Маддалена Конильо, Стефано Бусколи, Алессандро Ди Микеле, Мария Кристина Маркетти, Кьяра Валенти, Анджела Гамбелунге, Лука Фанаска, Мония Билли и Стефано Чианетти.Первый вариант рукописи был написан Стефано Пагано и Лореллой Маринуччи, и все авторы прокомментировали предыдущие версии рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Регулятор

в США добавляет путаницу вокруг нагретых табачных изделий

1. Анна Б. Гилмор, профессор1,
2. Софи Бразнелл, аспирантка1
1. ¹ Исследовательская группа по контролю над табаком, Департамент здравоохранения, Университет Бата, Бат, Великобритания
1. Для корреспонденции: AB Gilmore abcg20 {at} ванна.ac.uk

Производитель табака использует двусмысленное решение FDA

Появление новых потребительских табачных изделий и никотиновых изделий, особенно электронных сигарет и нагретых табачных изделий, 1 вызвало споры и замешательство. Отчасти это связано с тем, что эти два продукта часто объединяют, не в последнюю очередь Philip Morris International, крупнейшая в мире табачная компания2. В условиях неумолимого сокращения мировых продаж сигарет будущее компании теперь зависит от IQOS, ее флагманского табачного изделия с подогревом.23

Тем не менее, электронные сигареты и нагретые табачные изделия — это совершенно разные вещи. Электронные сигареты не содержат табака, но нагревают никотинсодержащие жидкости для получения аэрозоля для вдыхания. Они могут (с поведенческой поддержкой) помочь курильщикам бросить курить4 и, хотя и небезопасны, в настоящее время считаются менее вредной альтернативой курению для тех, кто полностью бросает курить.45 Напротив, IQOS (продается через Altria в США), который нагревает небольшие сигареты. как и табачные стики, не было доказано, что они позволяют бросить курить или представляют значительно меньший риск, чем курение.1

В настоящее время путаница усугубляется недавним решением Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США относительно статуса IQOS в соответствии с критериями «табачного продукта с измененным риском» 6. Критерии с плохим названием фактически включают два разных стандарта — изменение риска и изменение воздействия. FDA отрицало статус модификации риска для IQOS, четко заявив, что Филлип Моррис «не продемонстрировал, что [IQOS] значительно снизит вред и риск заболеваний, связанных с табаком» 6. Вместо этого FDA предоставило только статус модификации с более низким уровнем воздействия.6

Филлип Моррис, тем не менее, поспешил представить это решение в ложном свете как «веху для общественного здравоохранения» 7, редко квалифицируя его как табачный продукт с модифицированным риском, хотя он официально разрешен как табачный продукт с модифицированным риском, но не отвечает критериям изменения риска FDA7. Глобальная кампания по связям с общественностью, использующая решение подтолкнуть другие правительства к открытию своих рынков или ослаблению правил, регулирующих IQOS.78, призвала Филиппины принять решение FDA в качестве «стартового блока» для разработки политики в области общественного здравоохранения.8

Минное поле

Как потребители и регулирующие органы пытаются разобраться в этом минном поле? Короткий ответ: нагретые табачные изделия играют небольшую роль на индивидуальном или популяционном уровне. Более полный ответ — они должны понимать сложное решение FDA.

Для индивидуальных курильщиков решения о новых продуктах достаточно просты — если продукт помогает им бросить курить или действительно менее вреден, чем курение, он может (при исключительном использовании) снизить риски для здоровья.При отсутствии доказательств того, что IQOS помогает бросить курить, курильщики, желающие бросить курить, должны придерживаться научно обоснованных вмешательств по отказу от курения. В отношении вреда решение FDA6 в целом соответствует имеющимся на сегодняшний день данным о том, что IQOS подвергает пользователей более низким уровням некоторых вредных веществ, чем сигаретный дым, но это не приводит к снижению риска заболевания по сравнению с курением сигарет19

Например, независимый Анализ клинических данных Филиппа Морриса показывает, что переход от курения к IQOS не приводит к значительным улучшениям легочного воспаления и функции или биомаркеров, позволяющих прогнозировать серьезное заболевание.1011 Тем не менее, выдавая приказ об изменении воздействия, FDA должно рассматривать «разумно вероятно», что будущие исследования покажут снижение смертности и заболеваемости по сравнению с продолжающимся курением.69 Это возможно, поскольку самое продолжительное испытание (26 недель) может быть слишком короткий, чтобы определить потенциальные выгоды.

Однако следует соблюдать осторожность. Клинические данные Филипа Морриса и данные об аэрозольных эффектах не являются исчерпывающими, и на самом деле 56 потенциально вредных веществ в аэрозоле IQOS выше, чем в сигаретном дыме.612 Опасения по поводу исследования Phillip Morris IQOS2314 и неспособность опубликовать данные его долгосрочных исследований1516 усиливаются историей манипуляций табачной промышленностью с исследованиями и сокрытия вреда курения.1317 В настоящее время существует множество других продуктов, включая фармацевтический никотин. Курильщики, которые, как известно, являются безопасными, стремятся уменьшить вред, а не бросить курить, должны рассматривать нагретые табачные изделия как последнее средство.

Путаница с нормативными требованиями

Для регулирующих органов расчет риска и пользы более сложен.Даже внедрение продуктов, действительно менее рискованных, чем сигареты, может привести к ущербу на уровне населения, если им воспользуется большое количество людей, которые никогда бы не курили сигареты. В данном случае решение FDA является наиболее неожиданным, поскольку оно требуется для определения того, что даже порядок изменения его воздействия принесет пользу здоровью населения69. -Курящие кажутся неизбежными, учитывая задокументированный маркетинг Филиппа Морриса.218 Действительно, австралийский регулирующий орган с тех пор пришел к противоположному выводу, заявив: «Я не считаю, что ПВТ [нагретые табачные изделия] внесут значительный вклад в снижение вреда для населения» 19. Регулирующие органы должны также признать, что сосредоточение внимания на нагретых табачных изделиях может отвлечь их от доказательных мер, которые, как известно, сокращают потребление табака в больших масштабах.20

На этот раз мы, возможно, должны оставить последнее слово за Филипом Моррисом, который осторожно (стр. 17, краткое изложение заявки FDA) признает: «Не было продемонстрировано, что переход на систему iQOS снижает риск развития заболеваний, связанных с табаком, по сравнению с курением сигарет.”21 До тех пор, пока это не изменится, нагретые табачные изделия не играют никакой роли в общественном здравоохранении. Правительствам следует противостоять давлению с целью открыть свои рынки для этих продуктов и, если они уже есть, регулировать как нагревательные устройства, так и табачные палочки как табачные изделия в соответствии с рекомендациями Всемирной организации здравоохранения22. FDA должно сделать свою терминологию более ясной, чтобы гарантировать продукцию. которые соответствуют только критериям уменьшенного воздействия, не могут быть искажены как уменьшенный вред.

Сноски

• Конкурирующие интересы: Мы прочитали и поняли политику BMJ в отношении декларирования интересов и заявляем о поддержке со стороны Bloomberg Philanthropies, запрещающей табачные организации и продукты.Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, решении опубликовать или подготовке рукописи.

• Провенанс и экспертная оценка: Не введен в эксплуатацию; внешняя экспертная оценка.

Список литературы

1. ↵
2. ↵
3. ↵
4. ↵
5. ↵

   Национальные академии наук, инженерии и медицины. Последствия электронных сигарет для здоровья населения. 2018. https://www.nap.edu/catalog/24952/public-health-consequences-of-e-cigarette

6. ↵
7. ↵
8. ↵
9. ↵
10. ↵
11. ↵
13. ↵
14. ↵
15. ↵
16. ↵
17. ↵
18. ↵
19. ↵

    Австралийское управление терапевтических товаров.Уведомление об окончательном решении изменить (или не изменять) текущий стандарт ядовитых веществ, 24 августа 2020 г.

20. ↵
21. ↵
22. ↵

Через шесть месяцев после перехода с обычных сигарет на IQOS

Через год после моего брата посетил штаб-квартиру Philip Morris International в Швейцарии, он убедил меня перейти с обычных сигарет на систему подогрева табака IQOS и принес мне устройство вместе с четырьмя упаковками HEETS (которые представляют собой табачные мини-стики, которые нагреваются в устройстве).

Я давно хотел бросить курить, но не мог. По правде говоря, я не хотел останавливаться, но мои братья, особенно Наджиб, который вообще презирает курение, оказывали на меня давление, поэтому мы в конечном итоге остановились на IQOS при условии, что я больше никогда не буду курить традиционные сигареты, и я должен сказать, что это работает достаточно хорошо. так далеко.
Я обычно веду небольшой личный дневник, но мне показалось, что я поделюсь с другими курильщиками, каково это было переключиться с обычного курения на IQOS.

Week1: Поначалу IQOS был странным на вкус и запах. На самом деле мне не казалось, что он дает мне такое же количество никотина, поэтому я оставался рядом с обычными курильщиками, чтобы вдохнуть запах.

Week2: Я изо всех сил пытался не курить обычную сигарету, но я был приверженцем IQOS и начал к нему привыкать. Я использовал его от 5 до 6 раз в день, а на вечеринке использовал половину коробки. У меня всегда было желание закурить нормально, особенно с напитками или кофе.Честно говоря, я жаждал запаха (сигарет) больше, чем вкуса.

Week4: Меня начал раздражать запах сигарет. Я даже попробовал сделать затяжку, чтобы посмотреть, не пропущу ли я ее, и мне это не очень понравилось. Они все еще не вызывали у меня отвращения, как у некоторых моих друзей, перешедших на IQOS.

Два месяца спустя: Я начал избегать мест для курения, ненавидел запах сигарет на моей одежде после вечеринки и не чувствовал необходимости использовать IQOS так часто, как раньше.Я также почувствовал, что мои легкие стали намного чище, что помогло мне во время тренировок в тренажерном зале.

Шесть месяцев спустя: после первых двух месяцев почти не изменились, и теперь я регулярно пользуюсь IQOS. Я вообще не люблю сигареты, я всегда был в хорошей форме, но с тех пор, как я бросил обычную сигарету, я значительно улучшился. Это изменение было для меня положительным, и я должен поблагодарить своих братьев за это.

Теперь, если вы спросите меня с точки зрения здоровья, я прочитал много исследований, и они все еще спорят о влиянии IQOS на здоровье, но для меня важно переключиться на что-то менее вредное, а не излечить свою зависимость от момент.Надеюсь, следующим шагом будет полный отказ от занятий, но я еще не там.

Итак, подведем итоги:
Могу ли я вернуться к нормальному курению? Вовсе нет.
Я бы бросил IQOS? Не скоро.
Я пробовала ароматизированные вейпы? Я пробовал некоторые из этих миниатюрных кальмаров, привезенных с Alibaba или другого местного места, и, честно говоря, они отвратительны.
Есть ли альтернативы IQOS? Я слышал о нескольких и пробовал пару, но на данный момент я очень доволен IQOS.Последнее, чего я хочу, — это изучать новые возможности и курить больше, lol!

.